有关石蜡切片

yeshch

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恳求各位前辈传授一些做好小鼠睾丸石蜡切片的技巧吧？尤其是一些容易出问题的地方，比如脱水，渗蜡，包埋，HE染色，免疫荧光等。小弟在此谢谢各位了！

zhen022

到网上找教程，按照教程来应该问题不大啊

fuyinsheng

按照常规步骤去做就行，需要注意的是渗蜡的时间根据组织块大小适当加长渗蜡时间，脱水，染色等步骤其实和常规也没多大区别，HE染色苏木精和伊红染色时间按4:1，自己按照正常步骤做下预实验也就摸索出来了。再一个就是固定要充分一些。
1 w* y4 e  A5 W* v3 G7 a7 J! i第一次做的话按照如肝、肾等组织的常规步骤来做，增加几个对比实验，两次以内就能摸索出来

yeshch

回复 zhen022 的帖子- _; T" ^: C: k1 @9 K

4 r& M; \* f: N1 D& R我是做得出来，但是效果不理想，我想做的更好，所以最好是向更有经验的人请教一些细节经验

yeshch

回复 fuyinsheng 的帖子
9 d' G& J' D+ V2 M+ c; p
  \& l5 n' @: f7 u, B( s多谢了！我做过几次了，材料是小鼠睾丸，切出来总是不完整；甚至材料边缘完整，而内部总有很大空隙，所以不太明白问题在哪里，会是脱水浸蜡没处理好吗

fuyinsheng

回复 yeshch 的帖子* L$ w  {0 ?7 y: U) J5 \
9 F; B8 f! g; |( A5 Y
两个原因，一个是固定可能没固定好，另外一个就是浸蜡不充分了，需要增加浸蜡的时间，不知道你是否分两次或三次浸蜡。另外如果你们实验室温度比较高的话建议将蜡块放在4度冰箱中保存，这样保证石蜡不会过软。

fuyinsheng

回复 yeshch 的帖子8 C! p. \) f% E6 v( y) p% F6 P

$ e6 \9 g, ^3 l9 L通常切片内部中空都是浸蜡这块出的问题，而切片不完整的话固定和浸蜡都很重要了。你可以先调整这两部分，如果还是不行可以考虑减少脱水时间

yeshch

回复 fuyinsheng 的帖子
7 u3 I3 O, i% g* B# L3 ]5 j
3 s* S+ h2 X, K怎么能分辨固定是否适当呢？（在刚固定完的时候）。我也考虑是浸蜡不充分，但三次浸蜡，并且第三次接近20h，应该足够了吧？我是保存在四度的

yeshch

回复 fuyinsheng 的帖子
+ [2 i  }$ _) N' M/ F3 x  }" A  Q# I) G
还要请教一下：我脱完水没有见到testes明显萎缩，反而是在包埋时发现皱缩的非常明显，这是什么情况？

fuyinsheng

回复 yeshch 的帖子4 C4 p7 L0 X3 v- B! h$ i; F
* P. M( W) @; T
你固定是多长时间，你可以做个对照，一个固定时间是现在的时间，一个再延长一些。脱水时间是不是太短了，这些都要考虑到。另外三次浸蜡是没问题的，但是前两次浸蜡很关键也要考虑浸蜡时间。