有关石蜡切片

yeshch

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: N" d* p; y1 W2 t( M恳求各位前辈传授一些做好小鼠睾丸石蜡切片的技巧吧？尤其是一些容易出问题的地方，比如脱水，渗蜡，包埋，HE染色，免疫荧光等。小弟在此谢谢各位了！

zhen022

到网上找教程，按照教程来应该问题不大啊

fuyinsheng

按照常规步骤去做就行，需要注意的是渗蜡的时间根据组织块大小适当加长渗蜡时间，脱水，染色等步骤其实和常规也没多大区别，HE染色苏木精和伊红染色时间按4:1，自己按照正常步骤做下预实验也就摸索出来了。再一个就是固定要充分一些。
3 ]/ m8 K$ q" S第一次做的话按照如肝、肾等组织的常规步骤来做，增加几个对比实验，两次以内就能摸索出来

yeshch

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, q5 w1 g" d! J2 L
- W% W) G4 n) Q- r我是做得出来，但是效果不理想，我想做的更好，所以最好是向更有经验的人请教一些细节经验

yeshch

回复 fuyinsheng 的帖子1 }* `, c+ b7 L7 `
1 h" L  K7 Q& `1 ?8 {/ O
多谢了！我做过几次了，材料是小鼠睾丸，切出来总是不完整；甚至材料边缘完整，而内部总有很大空隙，所以不太明白问题在哪里，会是脱水浸蜡没处理好吗

fuyinsheng

回复 yeshch 的帖子5 O3 ^# r7 I9 u3 O( D, o  Z- z

% N; @' C# R9 }, y* S+ p两个原因，一个是固定可能没固定好，另外一个就是浸蜡不充分了，需要增加浸蜡的时间，不知道你是否分两次或三次浸蜡。另外如果你们实验室温度比较高的话建议将蜡块放在4度冰箱中保存，这样保证石蜡不会过软。

fuyinsheng

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通常切片内部中空都是浸蜡这块出的问题，而切片不完整的话固定和浸蜡都很重要了。你可以先调整这两部分，如果还是不行可以考虑减少脱水时间

yeshch

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$ z# n; q6 W$ `: V; p怎么能分辨固定是否适当呢？（在刚固定完的时候）。我也考虑是浸蜡不充分，但三次浸蜡，并且第三次接近20h，应该足够了吧？我是保存在四度的

yeshch

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还要请教一下：我脱完水没有见到testes明显萎缩，反而是在包埋时发现皱缩的非常明显，这是什么情况？

fuyinsheng

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你固定是多长时间，你可以做个对照，一个固定时间是现在的时间，一个再延长一些。脱水时间是不是太短了，这些都要考虑到。另外三次浸蜡是没问题的，但是前两次浸蜡很关键也要考虑浸蜡时间。