坑爹的消化，胰酶和细胞都不行了吧

倒腾细胞

视野下看着很漂亮的细胞 怎么搞都消不下来 甚至大部分都没有缩成圆球状
" R# P2 Z- @. Z( Q3 o/ d视野下看着觉得可以扔掉的 大部分能消下来
0 O! d' s- x% G6 C( a) _! l6 [% c最后把两瓶T75消下来的 离心 重悬到T25
7 D% w5 u; J$ a: P' t- T1 H感觉乱来了 坐观变化

荷荷

回复 倒腾细胞 的帖子& {2 c3 {6 H6 G: K& z

2 i3 H/ W9 `5 H. A) y8 @' {$ PT75用血清养的话加2ml胰酶，消化时间在1min之内

倒腾细胞

回复 莫邪小仙 的帖子1 g% H' `& Y% W' L
( |# o; g$ X, H4 d0 q* C3 x' r7 K

6 M! ]$ E+ @2 O) Q3 C7 l5 t. h" _$ [我有用PBS清洗 胰酶3ML应该是能铺开的吧 至于合适的时间这个问题 应该是不能超过5min的吧
$ I, X& g# T2 z; Z& X( [, S% b综上所述，要么细胞有问题 要么胰酶有问题 才会这么坑

莫邪小仙

前几天我们也遇到了这样的问题，分析当时的原因有以下几点：( C7 r7 Y7 N# j) J% j2 [' Q
1. 消化前没有用生理盐水清洗，因为有残余培养液的存在主要是血清的存在，导致胰酶消化效果受影响
0 M6 |9 b/ s) a- Y2. 加入胰酶的量太少，T75的瓶子加入3ml，基本没有铺开整个瓶子' e( V2 q/ J' k5 @
3. 消化时间太短，在胰酶量少的情况下消化了2ml左右，仅有1/4的细胞消化下来" n% I7 r$ o8 b( s5 T( x7 P
4. 反复消化，看到大部分细胞没有消化下来又继续消化，有1/3的细胞下来后收集细胞后又加入胰酶再次消化，最终仍有1/3的细胞还贴在壁上，所幸后来细胞长的还不错. h1 E9 W& b( ~0 O1 o( ?
综上所述，应该先清洗再加入适量的胰酶消化合适的时间

倒腾细胞

回复 荷荷 的帖子
$ g  q$ g/ ]; W( C3 h7 z& p
2 H, T! X$ d! R& K' Y# z大鼠MSC 三代了吧 很差劲 话说你们T75的瓶子加几毫升胰酶呢前辈

倒腾细胞

回复 fuyinsheng 的帖子
' J6 H/ r% y) {7 b7 `9 j
  p) g- a+ p' X( N! I! M6 ^7 i7 X谢前辈

水念人倦

个人习惯浓度0.05%，每50T 2ML，拍个1-2分钟就可以终止了，终止了再拿枪吹吹，效果还不错，楼主可以试试。9 t9 T7 R) @; R0 b6 E4 P+ @2 x: d

% @7 K  V  ^) C" _6 C温度的话室温就行，感觉37的话不好控制，总担心早消化下来的细胞会受不了，个人看法。

水念人倦

回复 fangfang2016 的帖子% y5 y  G, y8 [! P! g

/ Z# ]$ E7 V- F0 q! }3 p请教一下多次消化怎么弄呢？把几次终止的混合液全部吸到，最后一起离么？" l# r' q1 U7 {
: s2 ]( r! D8 ], e8 G+ x4 Q
这样的话后面的会影响活率的么？层主有没有对多次消化的细胞计活率啊，求解~

fangfang2016

个人觉得：若消化不下来，可以尝试少量多次消化，但每次时间不宜过长及时加入培养基终止消化。

CELL007

消化前，用PBS或者注射液洗涤2遍，然后再加胰酶（胰酶要在37度水浴过的），然后放培养箱里，如果细胞消化下来的不多，就延长时间消化。细胞长了几天了？如果长的很密，长得时间又长的话，也是很难消化的。