坑爹的消化，胰酶和细胞都不行了吧

倒腾细胞

视野下看着很漂亮的细胞 怎么搞都消不下来 甚至大部分都没有缩成圆球状. @3 j  Q( j: S( p8 n7 n9 ]
视野下看着觉得可以扔掉的 大部分能消下来
( S& s# k3 v) o# n; o最后把两瓶T75消下来的 离心 重悬到T25- o2 x$ V4 J5 c7 a  u
感觉乱来了 坐观变化

hyde

原代建系的时候遇到过，消化不下来就有可能不是你想要的细胞，

buildcountry

消化的时候放在37℃烘箱里多孵育一会或许能够帮助快速消化下来

月_幻影

LZ消化的时候有没有洗净残余的培养基呢？
1 b- r4 ~) N% W# y! p, t' Z% d! L另外胰酶用前最好也复温至37℃、8 Z3 w, F+ A, V
消化的时候也可以放入培养箱里消化，效果也很好。

fuyinsheng

我之前做的时候也发生过，有几点注意一下可能会有帮助9 W# I1 \. J) n, Q6 M5 X3 t: P2 v, m
1、确保胰酶浓度是该细胞的最佳消化浓度，有些细胞属于非常难消化的，如果胰酶浓度低于最佳消化浓度的话即使再长时间，在适合的温度也消化不下来，有的细胞需要0.25%甚至0.5%的胰酶。另外胰酶消化前充分清洗残留FBS，并且确保吸净所有残液，可以防止胰酶失活或被稀释。
2 k" |5 c4 B2 _2 m- Y4 ]% _2、胰酶在37度环境下才能发挥作用，一定要提前预热，否则加入胰酶后才放进去，短短的消化时间内胰酶都处于不活跃状态
& q2 p. m; b' Z' b3 l. S3、如果想让你的细胞消化下来还能用，就把细胞消化时间控制在5min以内吧，5分钟消化不下来，用更长的时间及时消化下来了也够呛了

荷荷

回复 倒腾细胞 的帖子  i  x! G+ H* n0 e( f
) p2 U1 O! I0 O" U- P
不知楼主养的什么细胞，养了多久了，贴壁细胞培养时间长的话也是不容易消化的；/ x7 v0 @$ d0 I) Z. ^! ?
把培养基洗干净了吗、不然会影响消化效果的；, u. E' Z* y' c1 _! p
胰酶浓度，消化温度等等都是需要注意的细节。

buildcountry

1.消化细胞前胰酶放37℃复温，以增强酶活力。
3 u( b4 ~3 D  V3 T2.用含EDTA的胰酶消化能力更强
, r9 o6 g2 [; n1 }6 r2.倒丢培养基，并用PBS洗一次，洗干净，因为残留血清会终止胰酶的效果
7 T7 X( o* T6 W3.消化时放37℃孵育，会加快消化
3 x! v% G' n& |5 u0 d. |4.消化完后用含血清的培养基及时终止消化，以防细胞受损

buildcountry

1.消化细胞前胰酶放37℃复温，以增强酶活力。4 v# B6 c2 w0 p. X, m. e
2.用含EDTA的胰酶消化能力更强) w( b: ]7 J0 {( e
2.倒丢培养基，并用PBS洗一次，洗干净，因为残留血清会终止胰酶的效果
4 X% z8 e2 ~+ i/ a3.消化时放37℃孵育，会加快消化$ J8 D" w* f, K+ m  g( x
4.消化完后用含血清的培养基及时终止消化，以防细胞受损

CELL007

消化前，用PBS或者注射液洗涤2遍，然后再加胰酶（胰酶要在37度水浴过的），然后放培养箱里，如果细胞消化下来的不多，就延长时间消化。细胞长了几天了？如果长的很密，长得时间又长的话，也是很难消化的。

fangfang2016

个人觉得：若消化不下来，可以尝试少量多次消化，但每次时间不宜过长及时加入培养基终止消化。