坑爹的消化，胰酶和细胞都不行了吧

水念人倦

回复 fangfang2016 的帖子5 K" u, B( q: _( O% }0 I
! |; Y/ X* }$ ^/ g# x
请教一下多次消化怎么弄呢？把几次终止的混合液全部吸到，最后一起离么？
  y: Y& O5 q8 T6 w& c5 |4 `
0 O$ r2 A# w" i, M! i这样的话后面的会影响活率的么？层主有没有对多次消化的细胞计活率啊，求解~

水念人倦

个人习惯浓度0.05%，每50T 2ML，拍个1-2分钟就可以终止了，终止了再拿枪吹吹，效果还不错，楼主可以试试。% l+ [3 F5 X4 O3 I, _0 ?+ P
, t' B) s8 ?  F, [0 q0 a; x! u- S
温度的话室温就行，感觉37的话不好控制，总担心早消化下来的细胞会受不了，个人看法。

倒腾细胞

回复 fuyinsheng 的帖子$ P1 C. T4 I  e3 X2 S/ Y" ?
4 t4 C' z; |; u
谢前辈

倒腾细胞

回复 荷荷 的帖子. I' r- R1 j: m9 a; r
- Y5 [# `$ I$ I! a6 R& j- n/ c
大鼠MSC 三代了吧 很差劲 话说你们T75的瓶子加几毫升胰酶呢前辈

莫邪小仙

前几天我们也遇到了这样的问题，分析当时的原因有以下几点：
- y+ m$ @) f/ A1. 消化前没有用生理盐水清洗，因为有残余培养液的存在主要是血清的存在，导致胰酶消化效果受影响
/ I% K% W2 ~5 L6 S* y/ |0 ]6 W2 Q2. 加入胰酶的量太少，T75的瓶子加入3ml，基本没有铺开整个瓶子7 p7 r* a( u2 w3 P
3. 消化时间太短，在胰酶量少的情况下消化了2ml左右，仅有1/4的细胞消化下来$ ]+ U% R+ b) N/ T% G
4. 反复消化，看到大部分细胞没有消化下来又继续消化，有1/3的细胞下来后收集细胞后又加入胰酶再次消化，最终仍有1/3的细胞还贴在壁上，所幸后来细胞长的还不错0 ~6 Y3 u( l2 G! v/ M0 }0 x  Z
综上所述，应该先清洗再加入适量的胰酶消化合适的时间

倒腾细胞

回复 莫邪小仙 的帖子8 D. v# |5 }7 ~6 j1 Q

! L, V1 K1 Y7 q
% @4 y2 d, K; q. o$ [* D我有用PBS清洗 胰酶3ML应该是能铺开的吧 至于合适的时间这个问题 应该是不能超过5min的吧
, V( D4 X4 y$ M5 q综上所述，要么细胞有问题 要么胰酶有问题 才会这么坑

荷荷

回复 倒腾细胞 的帖子
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5 e, t% u% O: \% V( K6 {5 |9 UT75用血清养的话加2ml胰酶，消化时间在1min之内