干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
楼主: 倒腾细胞
go

坑爹的消化,胰酶和细胞都不行了吧   [复制链接]

Rank: 2

积分
207 
威望
207  
包包
142  

优秀会员

11
发表于 2014-10-7 16:28 |只看该作者
回复 fangfang2016 的帖子5 K" u, B( q: _( O% }0 I
! |; Y/ X* }$ ^/ g# x
请教一下多次消化怎么弄呢?把几次终止的混合液全部吸到,最后一起离么?
  y: Y& O5 q8 T6 w& c5 |4 `
0 O$ r2 A# w" i, M! i这样的话后面的会影响活率的么?层主有没有对多次消化的细胞计活率啊,求解~
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
207 
威望
207  
包包
142  

优秀会员

12
发表于 2014-10-7 16:32 |只看该作者
个人习惯浓度0.05%,每50T 2ML,拍个1-2分钟就可以终止了,终止了再拿枪吹吹,效果还不错,楼主可以试试。% l+ [3 F5 X4 O3 I, _0 ?+ P
, t' B) s8 ?  F, [0 q0 a; x! u- S
温度的话室温就行,感觉37的话不好控制,总担心早消化下来的细胞会受不了,个人看法。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 6 + 15 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 6  包包 + 15   查看全部评分

Rank: 2

积分
217 
威望
217  
包包
1284  

优秀会员

13
发表于 2014-10-7 20:27 |只看该作者
回复 fuyinsheng 的帖子$ P1 C. T4 I  e3 X2 S/ Y" ?
4 t4 C' z; |; u
谢前辈

Rank: 2

积分
217 
威望
217  
包包
1284  

优秀会员

14
发表于 2014-10-7 21:05 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 荷荷 的帖子. I' r- R1 j: m9 a; r
- Y5 [# `$ I$ I! a6 R& j- n/ c
大鼠MSC 三代了吧 很差劲 话说你们T75的瓶子加几毫升胰酶呢前辈
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
323 
威望
323  
包包
635  

优秀会员

15
发表于 2014-10-8 09:24 |只看该作者
前几天我们也遇到了这样的问题,分析当时的原因有以下几点:
- y+ m$ @) f/ A1. 消化前没有用生理盐水清洗,因为有残余培养液的存在主要是血清的存在,导致胰酶消化效果受影响
/ I% K% W2 ~5 L6 S* y/ |0 ]6 W2 Q2. 加入胰酶的量太少,T75的瓶子加入3ml,基本没有铺开整个瓶子7 p7 r* a( u2 w3 P
3. 消化时间太短,在胰酶量少的情况下消化了2ml左右,仅有1/4的细胞消化下来$ ]+ U% R+ b) N/ T% G
4. 反复消化,看到大部分细胞没有消化下来又继续消化,有1/3的细胞下来后收集细胞后又加入胰酶再次消化,最终仍有1/3的细胞还贴在壁上,所幸后来细胞长的还不错0 ~6 Y3 u( l2 G! v/ M0 }0 x  Z
综上所述,应该先清洗再加入适量的胰酶消化合适的时间
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 10 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
217 
威望
217  
包包
1284  

优秀会员

16
发表于 2014-10-8 13:10 |只看该作者
回复 莫邪小仙 的帖子8 D. v# |5 }7 ~6 j1 Q

! L, V1 K1 Y7 q
% @4 y2 d, K; q. o$ [* D我有用PBS清洗 胰酶3ML应该是能铺开的吧 至于合适的时间这个问题 应该是不能超过5min的吧
, V( D4 X4 y$ M5 q综上所述,要么细胞有问题 要么胰酶有问题 才会这么坑
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
322 
威望
322  
包包
139  

金话筒 优秀会员

17
发表于 2014-10-13 14:35 |只看该作者
回复 倒腾细胞 的帖子
/ V3 W, B% H8 q5 N/ ?. `
5 e, t% u% O: \% V( K6 {5 |9 UT75用血清养的话加2ml胰酶,消化时间在1min之内
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-6-10 10:39

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.