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楼主: 倒腾细胞
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坑爹的消化,胰酶和细胞都不行了吧   [复制链接]

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发表于 2014-10-7 16:28 |只看该作者
回复 fangfang2016 的帖子& r* b& w) z' e( w6 f' L% k9 h
- z: V7 N" k, a% E
请教一下多次消化怎么弄呢?把几次终止的混合液全部吸到,最后一起离么?4 T6 ?; X! I+ E9 m" K

/ K- u! S5 u3 h+ U/ n9 f这样的话后面的会影响活率的么?层主有没有对多次消化的细胞计活率啊,求解~
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发表于 2014-10-7 16:32 |只看该作者
个人习惯浓度0.05%,每50T 2ML,拍个1-2分钟就可以终止了,终止了再拿枪吹吹,效果还不错,楼主可以试试。
9 y  c- G2 _# S7 Z4 Y5 X( d* l# U+ J
温度的话室温就行,感觉37的话不好控制,总担心早消化下来的细胞会受不了,个人看法。
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发表于 2014-10-7 20:27 |只看该作者
回复 fuyinsheng 的帖子) g5 O# V: `; ~+ u: y! T
# r) j' `( V5 X. x4 t
谢前辈

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发表于 2014-10-7 21:05 |只看该作者
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回复 荷荷 的帖子
; v) x: `- g8 A% o; I  w/ |
7 f7 g$ B, B/ k2 f; _8 R大鼠MSC 三代了吧 很差劲 话说你们T75的瓶子加几毫升胰酶呢前辈
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发表于 2014-10-8 09:24 |只看该作者
前几天我们也遇到了这样的问题,分析当时的原因有以下几点:
- K1 H  t7 b$ z3 ^1. 消化前没有用生理盐水清洗,因为有残余培养液的存在主要是血清的存在,导致胰酶消化效果受影响( }9 D  k# x" L8 U6 v( ^
2. 加入胰酶的量太少,T75的瓶子加入3ml,基本没有铺开整个瓶子
4 K* `+ @8 F4 t& \" c: e3. 消化时间太短,在胰酶量少的情况下消化了2ml左右,仅有1/4的细胞消化下来, _5 A# t# H+ H( r2 v# w6 J' E$ R
4. 反复消化,看到大部分细胞没有消化下来又继续消化,有1/3的细胞下来后收集细胞后又加入胰酶再次消化,最终仍有1/3的细胞还贴在壁上,所幸后来细胞长的还不错
7 u9 H7 Q& u( O9 r4 q& y" c" G: X综上所述,应该先清洗再加入适量的胰酶消化合适的时间
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发表于 2014-10-8 13:10 |只看该作者
回复 莫邪小仙 的帖子
  T, Z; f2 J& w+ A* E& N3 Z- s  ~( n

! I7 {  {: J! H7 E( H我有用PBS清洗 胰酶3ML应该是能铺开的吧 至于合适的时间这个问题 应该是不能超过5min的吧
/ w- S6 N! K* l# R* t综上所述,要么细胞有问题 要么胰酶有问题 才会这么坑
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发表于 2014-10-13 14:35 |只看该作者
回复 倒腾细胞 的帖子) F4 @: t% D  B7 X% G9 f

1 d  C6 M+ C5 ?& ZT75用血清养的话加2ml胰酶,消化时间在1min之内
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