坑爹的消化，胰酶和细胞都不行了吧

水念人倦

回复 fangfang2016 的帖子, Z: s- R. h( o  F

! S7 m7 X% x2 Y请教一下多次消化怎么弄呢？把几次终止的混合液全部吸到，最后一起离么？
# I$ z- N0 G! Q3 t+ O7 ~3 R2 W& W4 z/ g5 }# U
这样的话后面的会影响活率的么？层主有没有对多次消化的细胞计活率啊，求解~

水念人倦

个人习惯浓度0.05%，每50T 2ML，拍个1-2分钟就可以终止了，终止了再拿枪吹吹，效果还不错，楼主可以试试。% F# a, P" b( o! o; |, u4 o
+ I; `% m6 y( b+ F- H" E
温度的话室温就行，感觉37的话不好控制，总担心早消化下来的细胞会受不了，个人看法。

倒腾细胞

回复 fuyinsheng 的帖子8 {# `0 w. h0 F
. z  {6 W+ z2 |& H" O
谢前辈

倒腾细胞

回复 荷荷 的帖子
2 F& i) x# I3 ~9 ~$ [, W
( t1 p5 |4 D" Q! j+ a0 b大鼠MSC 三代了吧 很差劲 话说你们T75的瓶子加几毫升胰酶呢前辈

莫邪小仙

前几天我们也遇到了这样的问题，分析当时的原因有以下几点：
3 }9 k7 _1 s# ^9 c8 U1. 消化前没有用生理盐水清洗，因为有残余培养液的存在主要是血清的存在，导致胰酶消化效果受影响
& U3 n* a, d( m2. 加入胰酶的量太少，T75的瓶子加入3ml，基本没有铺开整个瓶子7 u8 E6 p$ b" p* y1 E* P
3. 消化时间太短，在胰酶量少的情况下消化了2ml左右，仅有1/4的细胞消化下来" G  ~. @. N) ]/ g- R+ Z" ?* Z
4. 反复消化，看到大部分细胞没有消化下来又继续消化，有1/3的细胞下来后收集细胞后又加入胰酶再次消化，最终仍有1/3的细胞还贴在壁上，所幸后来细胞长的还不错
6 n5 }4 f% h1 ?! L: e" J综上所述，应该先清洗再加入适量的胰酶消化合适的时间

倒腾细胞

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$ A) F3 O2 i$ O2 b3 M2 {6 u0 i' \" F2 t, x" r2 M, c5 G: a
我有用PBS清洗 胰酶3ML应该是能铺开的吧 至于合适的时间这个问题 应该是不能超过5min的吧
& ~& q3 T* q3 U! v: R/ w综上所述，要么细胞有问题 要么胰酶有问题 才会这么坑

荷荷

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T75用血清养的话加2ml胰酶，消化时间在1min之内