坑爹的消化，胰酶和细胞都不行了吧

水念人倦

回复 fangfang2016 的帖子& r* b& w) z' e( w6 f' L% k9 h
- z: V7 N" k, a% E
请教一下多次消化怎么弄呢？把几次终止的混合液全部吸到，最后一起离么？4 T6 ?; X! I+ E9 m" K

/ K- u! S5 u3 h+ U/ n9 f这样的话后面的会影响活率的么？层主有没有对多次消化的细胞计活率啊，求解~

水念人倦

个人习惯浓度0.05%，每50T 2ML，拍个1-2分钟就可以终止了，终止了再拿枪吹吹，效果还不错，楼主可以试试。
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温度的话室温就行，感觉37的话不好控制，总担心早消化下来的细胞会受不了，个人看法。

倒腾细胞

回复 fuyinsheng 的帖子) g5 O# V: `; ~+ u: y! T
# r) j' `( V5 X. x4 t
谢前辈

倒腾细胞

回复 荷荷 的帖子
; v) x: `- g8 A% o; I  w/ |
7 f7 g$ B, B/ k2 f; _8 R大鼠MSC 三代了吧 很差劲 话说你们T75的瓶子加几毫升胰酶呢前辈

莫邪小仙

前几天我们也遇到了这样的问题，分析当时的原因有以下几点：
- K1 H  t7 b$ z3 ^1. 消化前没有用生理盐水清洗，因为有残余培养液的存在主要是血清的存在，导致胰酶消化效果受影响( }9 D  k# x" L8 U6 v( ^
2. 加入胰酶的量太少，T75的瓶子加入3ml，基本没有铺开整个瓶子
4 K* `+ @8 F4 t& \" c: e3. 消化时间太短，在胰酶量少的情况下消化了2ml左右，仅有1/4的细胞消化下来, _5 A# t# H+ H( r2 v# w6 J' E$ R
4. 反复消化，看到大部分细胞没有消化下来又继续消化，有1/3的细胞下来后收集细胞后又加入胰酶再次消化，最终仍有1/3的细胞还贴在壁上，所幸后来细胞长的还不错
7 u9 H7 Q& u( O9 r4 q& y" c" G: X综上所述，应该先清洗再加入适量的胰酶消化合适的时间

倒腾细胞

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  T, Z; f2 J& w+ A* E& N3 Z- s  ~( n

! I7 {  {: J! H7 E( H我有用PBS清洗 胰酶3ML应该是能铺开的吧 至于合适的时间这个问题 应该是不能超过5min的吧
/ w- S6 N! K* l# R* t综上所述，要么细胞有问题 要么胰酶有问题 才会这么坑

荷荷

回复 倒腾细胞 的帖子) F4 @: t% D  B7 X% G9 f

1 d  C6 M+ C5 ?& ZT75用血清养的话加2ml胰酶，消化时间在1min之内