BMSC成软骨诱导分化

liukuantj

各位前辈，小弟正在做兔骨髓间充质干细胞成软骨分化。有几个问题想请教下有经验的前辈，希望指导。
% ]) |9 P4 \! s- B, a+ Q1，诱导分化培养基的配制是否需要添加血清？我看国外的文献大部分都是无血清诱导，但也有人推荐使用10%浓度的FBS，不知到底该选择哪种？
+ O! J. F# c% A1 z( R: k2，诱导分化培养基中抗坏血酸的浓度要多高，是50ug/ml还是50mg/ml？为什么文献差别那么大？- Q  z/ L$ I9 }3 e+ a
3，文献中采用pellet法进行诱导，不知道为什么诱导后，形成的小球越来越小？最后直径只有大约0.5-1mm左右，太小了。1 P8 W  r. U8 x7 ?6 q
4，诱导后的小球做切片，进行甲苯胺蓝染色，和HE染色，为什么会有很多空泡？是怎么回事？
$ I6 [; `! q0 e6 l7 H5，不知有没有前辈用过V型96孔板进行诱导？根本不能形成小球呀，只是一层膜状物质,不知是何原因？4 |0 R. H% U" P! c& Y4 v4 s2 H
还麻烦各位大神指导一下，不胜感激呀！

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:52
* E1 t1 r6 a& i" a! \+ n4 `各位前辈，小弟正在做兔骨髓间充质干细胞成软骨分化。有几个问题想请教下有经验的前辈，希望指导。( |) P- _& x8 m4 E. L
1，诱导 ...

) G* |5 }/ U4 @6 R谢谢鼓励，想请教下，为什么我用15ml离心管做pellet法诱导，最后的小球会越来越小？

ytumuyangren

MSC成软诱导，诱导液中不添加血清，体系中的ITS中含有一部分的血清替代物。) l8 T# c( a8 n2 b+ F4 j5 [
MSC成软诱导很不好做，建议买现成成熟的诱导液，方便快捷；自己配置的诱导体系不容易诱导成功；. @; w, o' p2 Q8 u* A+ Q+ ]! k# v3 M
采用pellet法，pellet会随着诱导时间的推移慢慢增大；预祝楼主实验顺利！