CIK流式检测设门问题

大海之家

       现在要做CIK从采血之日起至培养20内的CD3CD4，CD3CD8，CD3CD56双阳性标志的流式检测，血样先用分离液分离出白膜细胞，进行第一次流式检测。问题就是要测的以上标志为总的百分比，那么这还需要设门吗？（个人觉得不需要设，毕竟是测总含量，但第一次检测，经验不足），白膜细胞中含有一定比例的细小红细胞，会对结果造成影响吗？
1 i' A  Q: G) O2 M! H+ O& `        另外，如果要设门，需要调节散点图布局，这个依据是什么？检测用的仪器为贝克曼的FC500，烦请各位有经验的朋友解答以上问题，谢谢！

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是测CIK细胞培养20天内标志物含量，能否不设门？毕竟是获取占总细胞的百分比！双色上机，cd3cd56和cd4cd8的荧光抗体各一组，预计cd4cd8组的散点图会有cd4cd8双阳性细胞的出现，那么统计cd3cd4，cd3cd8双阳性细胞占比是否要减去cd4cd8双阳性的比例？初次操作，经验不足。