求助，有做过羊膜上皮细胞的大神吗？求帮忙

听不到

我是取得羊膜之后，分为两半，对之用PBS（双抗）进行洗涤，然后用0.05%的胰酶-EDTA消化20min（37°水浴），共消化了2次，终止后用250目筛，然后离心重悬，当时取得的细胞挺多的，种于两个10cm平皿中，但是48h后我换液后发现贴壁细胞非常少，而且形态各异，想请问下大家大概哪种细胞是羊膜上皮细胞啊？还有我操作的有哪里不对导致细胞量这么少呢?* }8 N% X. f6 w5 ]8 S. B
这是我种了两天之后的细胞（换液前)
+ S8 f2 C! n! [

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8 `' f# L& C1 K. @* m# ?
这是种了4天之后的细胞6 l8 B7 o) [% w/ }

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8 t" }; J/ @3 w/ P5 O5 c, S

yanxm920

回复 听不到 的帖子& T) q/ L0 K( ]4 |

1 o: o3 T( Z: j! ?/ W0 o" P2 ^老师这个培养体系DMEM/F12+10%FBS+10ng/ml EGF，有参考文献吗？

lju00

我看到你的间充质干细胞倒是有几个

听不到

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) e6 G9 F9 D$ R# d2 Q' n3 H  h# `4 r4 R4 l0 Y' M0 ~/ q6 ]% y& J
原理是什么啊？我没有查到...

chelran

你这个事消化的问题，如果你觉得有血细胞，你可以在胰酶消化之前，用EDTA先抚育10min，37度，用PBS 洗两遍，把血细胞去除
/ T- B1 J- ^  o  @

听不到

回复 coffee.cat105 的帖子3 B* y4 `3 h/ U9 k2 ]
6 a4 d" `0 k' F
没有，就正常种瓶的

coffee.cat105

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/ n$ G! W& C# ^7 a- P- H( b- D- D" d" D# M! J
哦，那你有没有用胶原铺板？

听不到

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  M8 \4 }8 C4 F8 Z
& W* V7 O3 i& L, E- \! x  l我拿到的挺大一部分，所以我理解的是拿的是胎盘上的，具体的我也不是很清楚，不过我是只撕下了有血的那层，我理解的是另外一面最外层就是羊膜了，羊膜上皮层不是在最外面吗？

听不到

回复 coffee.cat105 的帖子% q9 C) h+ J) e9 C" C! k# J/ Y  i! h8 R

/ ]5 X1 ~1 a/ t- T我不知道...我不是临床的，是找的医生要的羊膜，他直接给我的，所以我也不知道取得是哪部分
; t1 @0 H( |8 H. w& h/ Q; M

coffee.cat105

回复 听不到 的帖子: R3 S; o. C' V* U  ^

2 u. p# ^. u* B, e5 Q您取的羊膜是哪一部分？能描述一下吗？我是取的胎盘边上的部分，拿到后撕掉胎儿面的最外层和有血那一面的最外层，这样就能有细胞，但是贴壁很少，也很不长，我一直觉得我取材不对，是不是这个原因啊？5 G# q7 I* x: D5 S  y8 S