脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

chslyx

这段时间做的脐带都爬不出来细胞，请教一下原因
, ]9 H- J( {& e" n9 r* a1、剪下来的脐带放在装有PBS（8万UI庆大）的瓶子里面通过血液运输箱拿回来，运输过程两小时左右{刚开始我以为PBS里面加的是双抗，后面问的装PBS的人才知道加的是庆大}
% Z7 W. V: _1 b! ^" U% |5 J9 v2、清洗：PBS----75%酒精一分钟------PBS----PBS/ [* T3 z! U; V: O6 X4 p( ^
3、撕下动静脉，羊膜，剪碎，大约一小时（15cm脐带）
+ i6 A) x7 m6 u  k4、铺皿，用的是下面的培养基+12%FBS+20ng/mlEGF
( G/ n6 ?- r& D, J37摄氏度，5%CO2培养
; x; f7 t0 F9 l3 Z好几条都十多天还是没有出来细胞，请各位老师帮忙分析一下3 i1 U6 ~6 ~% U9 J; Y
% W% T  s. d# U. y

yaolinzhang

回复 chslyx 的帖子) s6 ^5 x! X# g! I5 J+ T! G0 [

) L" a" N- C) D- O6 Z1.运输时最好用培养基，尽量缩短时间；
5 H( ]$ S! ]/ Y. X+ {/ g2.用含双抗的PBS洗三遍即可，无需用75%的乙醇；  C; T5 _5 I5 m* k. b' t
3.可以试试DMEM低糖培养基。
- U* j# a" a4 j; z0 n  Q( S注：尽量缩短组织及细胞在外界的暴露时间，祝好运

qiaozhong.9876

回复 yaolinzhang 的帖子! c* ]: b  P. m' J/ K7 c9 f
0 @& p0 i7 U$ e9 @9 z9 c. h2 s
1.运输时最好用加了双抗的M液，尽量把时间控制在48小时之内0 d; I( U1 d, a, h1 Z: ~
2.操作过程没有多大问题，就是看你的图片，你剪的组织块比较大，剪的特别碎，最好是肉末状，整齐排在皿里，或者你用T75培养瓶养$ m4 k" a* G+ V+ J$ c0 d1 A& R5 p# A( O
3.把血清浓度调大按5:1的比例加" u, y2 {6 _1 m4 g
4.养脐带间充质干细胞加bFGF这种生长因子效果会更好
, {6 a+ O2 T3 d$ N5.你的培养基里应该再加一些丙酮酸钠

qiaozhong.9876

回复 qiaozhong.9876 的帖子/ W, |+ \/ f2 v7 V
. Q# _+ p# J- _. @+ f1 }
还有一点就是不知道你的血清是国产的还是进口的，用的是什么牌子的？( p6 C& N, y+ W0 ^: V" T$ b

chslyx

回复 qiaozhong.9876 的帖子. x' D6 V- L% q  E/ q1 Y, I/ _  [

+ U( F5 @8 I% E$ j7 ?5 v7 P% o- r血清是gibco的，进口的

chslyx

回复 yaolinzhang 的帖子
/ l2 u5 s; v, _! K/ O# P
8 i* M; D/ s$ Q$ L+ `8 b运输时用培养基，那培养基里面要加血清和双抗吗？

yaolinzhang

回复 chslyx 的帖子; D! c  Q, m8 u4 t) v+ r

- Z4 y3 ]* \' w  ]( Y不用加血清，但要加双抗

听不到

我是觉得你剪碎的组织块排列的太密了，细胞没有空间长了。还有用乙醇处理我觉得对细胞也是有伤害的。不过我运输的时候整过直接就放在标本袋里，然后放在冰盒里带回来，然后用加双抗的PBS各种洗，也还挺好的，所以我不认为是你运输时使用液体的问题，不过得快，我基本都是在4个小时之内，一般2个小时就拿到操作了

chslyx

回复 听不到 的帖子
, }: p- J/ I* G+ l2 L6 J" s, }* m: [9 ?8 g  U0 V$ @7 p
如果像我拍的那个培养皿的组织块的量，我可以分成两皿吗？

a52602589

第一 组织块太密集
) Y) W* @- Y2 |$ ?第二 建议更换培养瓶5 M$ T# [' a1 u: c
第三 看培养基颜色太淡 是否加入培养基过少