大鼠及小鼠骨髓间充质干细胞的培养问题

本草亮星

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0 G8 G4 l& A: P3 m" ~最近培养细胞时，遇到了一些问题，希望有经验的大侠指导一下！谢谢！！% z. b, J1 Z8 a' @7 j9 e  {9 {" k# \" e, ^
一、大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）) w) `4 B9 V5 d
今年10月份开始培养SD大鼠BMSCs。2012年曾培养过SD大鼠BMSCs，全骨髓贴壁法，原代在7~10天可汇合90%，1:3传代后2~3天可汇合90%。现在原代培养了20天才汇合90%，1:3传代后7天才可汇合90%。所用器材试剂和方法与2012年相同。问题及照片如下。
) n) e. p! R" C8 D- r培养基：DMEM/F12（含10%胎牛血清）- g0 R: ?  s2 g! i9 ?' b, M
说明：图1和图2中均是原代培养16天的的照片，图3（看上去细胞还可以）和图4中均是第一次传代培养7天的的照片。
# h7 T! V/ \2 T3 W# H. A问题：1.原代细胞培养时间过长是否细胞状态方面会变差？细胞生长缓慢的原因可能有哪些？- C  _4 i& u( X( O
2.图2和图4中黑色箭头所指的位置，看上去好像是一个椭圆形物质或结构内有3个到数个的小黑点，请问这是什么？
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图1 BMSCs,P0,16d,×40
2 r  T. }4 x. o0 h, H. I7 s' t. S: H- T, v$ p& {5 J) ?

! ]& U) n. k! j$ q- h$ z8 D" o图2 BMSCs,P0,16d,×400
( d7 t1 K, z( w& n' X6 x; m  ]' t5 t0 t8 V5 b( Q' O$ T
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图3 BMSCs,P1,7d,×40! p7 }$ W% p$ A* H$ F
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图4 BMSCs,P1,7d,×400& j+ j: M/ @% D* ?: j; h

& e, w/ z" Q& k1 v) I2 i二、小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）& w9 F8 T- V7 {
另外，今年11月份开始尝试培养C57BL/6小鼠BMSCs。首先是根据大鼠BMSCs的培养经验，采用全骨髓贴壁法，所用器材试剂和方法与大鼠的相同。此外，尝试使用密度梯度法分离培养小鼠BMSCs，所用器材试剂与大鼠的相同。照片及问题如下。; x5 v2 ^$ Z9 g9 L9 s
说明：图5、图6中采用全骨髓贴壁法，均是原代培养21天的的照片；图10，全骨髓贴壁法，原代培养26天的的照片；图7、图8和图9采用密度梯度法，分别是原代培养4天和8天的的照片。
6 K9 M: g- C/ e  {问题：1.图5和图6，原代在21天仍未见成片连接的梭形细胞。图10中细胞形态比较均匀一致。一般来说，BMSCs应该为梭形，在汇合后细胞集落连接成片，但在图5中并未看到，若不是BMSCs，那又是什么细胞呢？图10中的细胞是什么细胞呢？
# E$ S/ n) y* A6 w( h- k2 s2.图7，实验室有人说疑似支原体污染，请有经验者帮忙看看。
& x% l  E% K0 z! H, }+ U0 T7 M3.图8和图9，培养至8天，也未见明显的梭形细胞集落。图9中也可见小黑点，和大鼠细胞是一样的吗？
) b3 L5 `9 @% p' G" h2 V% {: c1 j6 s* _. R. ]+ p# c
图5 BMSCs,P0,21d,×40/ L; r+ d: a1 q- E. D/ g* C/ [6 I2 W1 t( T

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* V: T# o$ {& Y图6 BMSCs,P0,21d,×4000 z# ]1 a9 E# ]- f
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图7 BMSCs,P0,4d,×200
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/ n( g/ t  T8 e, b图8 BMSCs,P0,8d,×40
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0 Q& t* D- g  d0 s. j$ M  f$ D+ ?5 t图9 BMSCs,P0,8d,×400* L3 k# a: h; Y& K9 }9 z0 ]

5 }" G# @. d* g1 }* P: i& x& b( y5 v6 S0 K. t+ `2 Z
图10 小鼠BMSCs,P0,26d,×40

倒腾细胞

养的可真好

niuzer

生长缓慢：血清有问题否？如果是正规行货澳洲胎牛血清，那就把浓度提高到15%4 S/ B: Y- B) \3 o
箭头指的地方应该是核仁。
; f9 Z- j$ e9 m1 x  G& I7 a你细胞养的挺好的，图1、3、10，细胞形态很好，有几张图是否有点老化迹象

fisherwang

图6、7、9 细胞状态都很差，

fisherwang

2.图2和图4中黑色箭头所指的位置，看上去好像是一个椭圆形物质或结构内有3个到数个的小黑点，请问这是什么
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应该是 核仁