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本帖最后由 本草亮星 于 2014-12-4 21:49 编辑 : B+ x4 t' D/ s# V4 b/ \
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最近培养细胞时，遇到了一些问题，希望有经验的大侠指导一下！谢谢！！& P1 i$ V* S. q+ ?" n
一、大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）, \! ^1 a4 R1 Q( x( d0 B" Q
今年10月份开始培养SD大鼠BMSCs。2012年曾培养过SD大鼠BMSCs，全骨髓贴壁法，原代在7~10天可汇合90%，1:3传代后2~3天可汇合90%。现在原代培养了20天才汇合90%，1:3传代后7天才可汇合90%。所用器材试剂和方法与2012年相同。问题及照片如下。5 [1 @, I- `5 B* V
培养基：DMEM/F12（含10%胎牛血清）: G ], r1 v6 C0 `* r$ r8 U1 j
说明：图1和图2中均是原代培养16天的的照片，图3（看上去细胞还可以）和图4中均是第一次传代培养7天的的照片。
8 A: x9 {% ~) l3 Q/ j问题：1.原代细胞培养时间过长是否细胞状态方面会变差？细胞生长缓慢的原因可能有哪些？3 N; Y. V0 B) ~' l) [$ `
2.图2和图4中黑色箭头所指的位置，看上去好像是一个椭圆形物质或结构内有3个到数个的小黑点，请问这是什么？
; i) {: Q/ w9 j1 T. J& H9 K( z& V* w8 } m
图1 BMSCs,P0,16d,×40% y& W9 z; D4 m; E
7 }& \. ~) W7 @; _% I6 R8 P
+ j1 U9 f4 m: T# R" O: V
图2 BMSCs,P0,16d,×400
8 l# Z% J$ P) y T# b- n. I' H# T9 q7 W8 S9 @/ c5 f
" U2 k* J1 q6 j* y5 {; ^: _& l$ [图3 BMSCs,P1,7d,×40
5 ^8 R& }; M( U8 t$ ?4 c6 ^
% s# f8 y! V+ Y0 h* S$ L
: h" T3 u3 ?3 T' E& f. k图4 BMSCs,P1,7d,×400, i0 Z8 Q9 n Z7 L4 o
: B; A/ q+ ^! K' h8 [; @二、小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）
' J1 l7 Q: L! n另外，今年11月份开始尝试培养C57BL/6小鼠BMSCs。首先是根据大鼠BMSCs的培养经验，采用全骨髓贴壁法，所用器材试剂和方法与大鼠的相同。此外，尝试使用密度梯度法分离培养小鼠BMSCs，所用器材试剂与大鼠的相同。照片及问题如下。
1 S0 N! A* d& n0 D9 t, p3 x说明：图5、图6中采用全骨髓贴壁法，均是原代培养21天的的照片；图10，全骨髓贴壁法，原代培养26天的的照片；图7、图8和图9采用密度梯度法，分别是原代培养4天和8天的的照片。
+ x4 ^" M9 E% Z& L3 n问题：1.图5和图6，原代在21天仍未见成片连接的梭形细胞。图10中细胞形态比较均匀一致。一般来说，BMSCs应该为梭形，在汇合后细胞集落连接成片，但在图5中并未看到，若不是BMSCs，那又是什么细胞呢？图10中的细胞是什么细胞呢？
- ]! O- ]* |$ G- `% r& Y6 p+ G2.图7，实验室有人说疑似支原体污染，请有经验者帮忙看看。/ `) v w, q$ U7 C
3.图8和图9，培养至8天，也未见明显的梭形细胞集落。图9中也可见小黑点，和大鼠细胞是一样的吗？
7 B k) D( `) |; k# @) T6 E) }
7 g5 ?; T) c& ?" B u图5 BMSCs,P0,21d,×404 l4 F) k3 i0 Y- ^
: i1 B8 I4 \- j7 `0 y( S
5 Y! B% B8 x! I( T" \# J) \: w图6 BMSCs,P0,21d,×400
+ |: E1 n* B5 B) b, |4 p- @/ E* `' e
8 N- ~) d: s o X% O7 T; u( t
图7 BMSCs,P0,4d,×2004 p. x& X9 _8 M* [' c2 t, m
3 [) v% j, H$ v \) ]- X
9 W; L; q1 n3 Y, W- p# z图8 BMSCs,P0,8d,×40! c W, C7 ~; u9 w
+ W3 m; }& m- Z( m. K( C
+ ?6 L# g# N4 ?( \6 f7 z+ a图9 BMSCs,P0,8d,×400
& X, |3 T- W9 t; g5 L7 K; v
5 a: U( `- p1 c, T1 _1 c! a+ M& S7 @% l5 @! `/ T
图10 小鼠BMSCs,P0,26d,×40 |
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发表于 2014-12-4 21:39
