请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml
; R4 s; X7 a% ?, g# Z5 O0 U. h
2 I4 k* [8 n+ a, C0 K- q: C, W今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说
& q7 O0 q# O, ?0 B0 i下面是这次跑流式的图，. ]6 {5 s0 \  r% l9 K0 W% P* y
因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了" q- ^" l( |1 R! y. X+ S5 e& z9 C

7 U* _7 H3 }' j& N# F想请教各位老师，
$ F- b% P) F7 c( W5 b8 N6 s有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？
$ T! _/ m0 d$ b+ l5 ^有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？0 V  e7 Q: o! O  v( B
我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？
# N( O- @7 |) j: j( q' \- O$ r  e' `

dollar007

1确定下你的试剂有否过期；$ B1 y. l; b! C7 r, K. a9 W
2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；
( ~6 A1 H7 n  t1 Y/ C# Q/ {3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；- n" u# j# s9 @
4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

回复 dollar007 的帖子5 y3 z: P& F" R% M/ Z! N

$ F( q2 D2 Z( ^您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？1 \  m! f1 \) u) d0 f
是说70/70范围之内的都算么？
% q) v% V3 X2 X4 v1 ]我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子" I+ o5 h2 X: n( x6 F% B1 W
( y8 }5 G; F8 G% X
从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

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# p5 E% A6 f# [# x1 T6 V/ x
, a4 N4 x  C8 G6 q4 k8 j是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

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4 W4 B7 t( c& }: A0 q' [  v
: b8 A  d) T4 [% [+ i一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

回复 dollar007 的帖子6 b+ m/ o  j' F
% K& T5 r+ t& B7 O
请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

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