请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml9 t9 c) o( h1 D) o

( z, w' I0 v$ M" K! K7 n今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说9 ^3 {# l" o( L' c' Y3 @  S: V* a
下面是这次跑流式的图，$ h" f  b- S5 ?, U  ?& c
因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了: \9 f" w. X# a

! m1 y! K; A/ b% C2 C7 j想请教各位老师，8 V; Z# K& Y' }  `$ X; E  I( O$ J
有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？
* d& p9 w2 z4 ~* f  j1 \1 q. @. b有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？
3 l% V) Y& w; h我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？8 j+ R& u" n5 y, v* u

dollar007

1确定下你的试剂有否过期；9 j2 I! B8 {9 P7 h
2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；
9 A5 r. b5 j! j8 @3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；
: @: d! g7 S2 y4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

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* _0 t/ W! L- l6 N0 i7 T& D5 O  N9 Q* z9 b$ X/ W$ j
您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？7 ?& f$ T4 f0 _" b2 ]/ M
是说70/70范围之内的都算么？5 [1 P9 J( b; P+ F0 ?9 Z
我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子. n, I! y, k& G8 x  p* t2 d2 y
4 ~. _7 n  G4 n+ e) c6 j1 {8 o
从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

回复 lyj-0017 的帖子+ @2 l9 a3 o, l/ m% u$ D# g

3 ?9 y* l( D2 x, U0 M; ?是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子8 d8 x1 [5 B( t7 b9 y5 c

% O6 n* R6 M. n0 v一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

回复 dollar007 的帖子* ]5 ~; C8 p3 o/ c# r: G1 x

, {+ s- |7 s- M& A请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

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