请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml: R( a5 P; R3 Y* ], p% w  C

9 P3 K5 P% f3 |今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说
5 P) i+ U, m6 Z; Y, V1 u下面是这次跑流式的图，4 o2 ~0 q5 b, u, b1 e
因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了0 x8 s9 L& v' s+ x% x5 l5 J

8 [) |- O4 A' R想请教各位老师，
: O: V& N, f1 A有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？
% ^+ V% T) ?5 x有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？
' F" c2 {) f; i' O. r我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？
$ Y$ T( o2 V) b- T* |5 T

dollar007

1确定下你的试剂有否过期；
3 J' K- D8 P7 g2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；! i' S+ z$ E9 @8 e
3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；
- J2 g7 u( F8 L; b; p4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

回复 dollar007 的帖子1 u( T$ f6 p- f

/ A$ v) H4 H' R% _$ r您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？
$ r8 ]3 N! y, v6 C是说70/70范围之内的都算么？
8 x, Z$ v' v5 k# @我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

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, R! i3 w! v* g# b. @) b) ~3 v; L
& l( n$ B5 @3 b+ D3 C0 }从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

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- w( c5 M0 `5 S& z1 b- W# I8 k- b) t5 v/ O' B/ Z
是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

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8 P( U+ T) g5 L, d) R/ U% O% h$ q
一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

回复 dollar007 的帖子% E3 l: U, B8 C9 [
( X2 I. O# y/ v2 r  y" z
请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

回复 hyg5481655 的帖子* j, C6 e# r( w8 ?: P  c4 d
, @) X* T; P! t" q3 {  M
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