诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

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诱导分化5 M- n! E  L. u/ z7 i* ]4 h% O
细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。
( T1 i6 I( p/ G, L5 r" U( B8 c$ m. E
油红O配方
( b) F' p. }& `' W油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.
7 J2 s' }( B, K0 ~油红O染色, t7 d6 X, g# k- b
①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.
) P( X& j  ]; L+ C, }②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.. r0 ^0 I, J3 ?. f
③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.
; y7 y% D- y/ O) T! h④入油红O 染色15～25min.
( q; u, A) _% o( U6 z⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.
0 C+ [4 W; m! ?+ w: C9 k⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.