诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

richy

诱导分化4 g7 N  i9 ~& s$ b9 Q$ b0 R8 W
细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。
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( y# E# j! _. V8 j* r1 ~) p+ Q油红O配方" Q, f) N' ?6 Y) d% E8 ]
油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.
; _* Z, e3 T" L) i1 Q+ }% m油红O染色; P# m+ x; e1 c8 D
①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.7 z+ g1 _8 k: V/ {, m% P9 d! T# X
②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.8 ~4 s% ?: W1 C/ I" j/ K
③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.9 g, }/ ~# x! e2 r$ k! U- h
④入油红O 染色15～25min.
' m2 d6 @8 ~( g/ [( ~/ S⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.: \$ ^& y0 |4 H6 C1 R
⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.

张俊克

多谢多谢

heshq106

细胞固定的时间太长了！