诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

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诱导分化
+ k& H7 f! J. y) D3 [. ^% u& \& z细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。3 t) q2 U: ]0 b

- d/ P. b8 O, l: M油红O配方
" N2 G: q+ P! q8 x6 D# Y油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.# u1 ^' Y& P& ?+ `  O3 F0 F
油红O染色
: `& m1 ]; k% s& G1 `2 p- ~) Z7 Q①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.
) L& l2 z$ j" M/ Y6 i+ F1 ~! D②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.
& E- l( {* g9 \③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.2 }" D' |4 w2 N8 Y
④入油红O 染色15～25min.0 z+ Q0 v: M" H1 T  B
⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.
/ k; {4 Y- P) z7 p⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.

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细胞固定的时间太长了！

张俊克

多谢多谢