胎牛血清培养转无血清培养间充质干细胞

莫邪小仙

最近做有血清转无血清培养，细胞总是死掉。大家帮忙分析一下，具体操作如下：1.复苏之前冻存的有血清培养的细胞，传代培养。2.待细胞状态较好时收集细胞，用无血清培养基洗两次，再重悬接入新瓶，加入无血清培养基培养。3.但是第2天细胞就死光光了。。。
" N- N7 P/ ^3 v' Y8 M* h( K( U加大接种密度也不行，另外好多人都说要进行无血清梯度培养，但是那样要经过好几次传代，能有什么办法直接从有血清培养直接转到无血清培养，并且细胞不全部死完的？

wuxiao101325

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1 k" ^' C% F7 R+ L
: F) c  q! ?8 y9 w$ }. U你的无血清培养基是自己配的么？估计要么是你的培养基有问题，要么就是在转无血清培养时培养皿或瓶要预铺基质（如geltin），按我的经验，建议你转换无血清培养前先加1%胎牛血清，或者铺基质，如果不铺基质的话建议你换康宁cellbind系列的培养皿/瓶试试看。

野猪

我觉得也是你培养基的问题啊，直接喂PBS都没有死得那么快啊

william

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! U  W3 S0 u+ A( Y& X
同意，呵呵，不过“直接喂PBS”确实太逗了

王张凡

梯度培养不会要传代很多代，原代用10%，P1用5%或3%，这代之后冻存一部分，传代一部分，P2用无血清的就好了呀，才两代状态很好的。

王张凡

梯度培养不会要传代很多代，原代用10%，P1用5%或3%，这代之后冻存一部分，传代一部分，P2用无血清的就好了呀，才两代状态很好的。

莫邪小仙

回复 wuxiao101325 的帖子6 b8 ?, O! N. _* N- e

/ E2 z- W' e4 W) m# y' f不是自己配的，是买的商品化的，里面有双抗和因子用的时候直接加进去就可以了。没有铺基质，用的nest的瓶子。

莫邪小仙

回复 野猪 的帖子6 x) O8 _/ j  X( _; z( x
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培养基是买的，厂家说没有遇到过这种情况。。。你不知道有多惨，细胞死的我都心疼，刚养出来的就被无血清祸害死了

cloudycity

试一下包被胶或是连接蛋白啥的

维维睡啦

刚开始转化为无血清培养，加适量的血清替代品就可以，不过血清替代品较贵，生物活性是血清的5倍，这样在复苏培养就可以无血清培养了。如果考虑成本，可以在以后培养中逐代减少添加量就可以了。