这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，
, K9 [# B) V- b6 ^- w6 j2 L6 Q1 h% i8 W3 c# f4 T+ F$ P
7 t+ n" p3 X: i8 i) T  [- b
这是培养至D4的外周血CIK% b' w9 H# {1 `/ K4 G& ~. u- X- z. S
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
) `) i0 W# a5 j2 Y0 @5 e. m# J( T5 p5 w0 Y. r
D0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了( N- J6 k" M" A5 z" Y
  t" b* ~- z- k; b& F
CD56单阳性的会是什么细胞呢？1 ^8 T! p& k$ o" r
NK？
# C9 j1 I' T% |6 T但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？$ p6 I0 b" g( V% q% A! z* ^* _
$ W. ]2 y: A) ]; I' {& Q$ n: N
画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......
" X! E4 T( C5 e% q
2 p% h) H; W5 }: |, l求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

回复 baby00000003 的帖子7 d8 c, o3 J; z/ Q' E

- j% d( \7 ?: |! T; e! S  ]- A嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子
/ q# Z) F' P) O5 C; a1 L
4 P# H1 p* S. e* k) U# N那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......" x6 u7 I4 L! Z# U8 p' W5 h
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......
; k3 L" |* d$ f5 C# X  V0 A如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。+ V6 N; r+ s; u! T" y
CIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。9 K! ?7 S% {* |) d! z
另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

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左边那个图是isotype，+ l( s+ F' \& a
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......
- g, i: Z( A0 @) [# W/ E# DD0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了
, ^6 [: y3 @! g' m& e我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚