这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，8 ~- X1 a- r' x, g
8 J5 @4 l) ~" Z! T; n" c/ d

( {2 Q7 J& @& s* E  X' ?6 ~' ]1 h这是培养至D4的外周血CIK1 d" l7 ~7 W1 b- ]7 ~/ ~) G
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
# c* Z3 ]. O* y% i( [
: v( O9 Q) F! XD0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了
) C% C2 g, J! U5 W
$ d1 f2 j; l+ j+ E5 _/ HCD56单阳性的会是什么细胞呢？
4 W% l5 [% n! o, ]3 W2 v5 N# eNK？3 j) G% }& B3 L8 F2 L$ _# [
但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？7 C$ b) E. V3 X; i9 e/ x5 w

. o' y  ~  @) g$ r画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......
; i& X8 |9 h5 U; ?8 W$ q# H
# h4 i: i2 z- L/ S& \( `* F求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

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* F, A7 ]* ?1 D, ?; K
1 ]; }5 X; O8 ]* p+ s3 p嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子3 O$ J6 Z4 m4 v! I1 X! R, d

( O2 t+ ?& p3 R9 s+ {, k2 ]那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......! p4 J- r2 d9 f+ g, K, w
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......- D$ S* q: M! c3 k0 h& o+ K5 b- H
如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。
& Y$ J, x( m% I1 M7 ICIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。* K( `) ?& A; x9 M1 e% r# y
另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

回复 暖羊羊 的帖子
' {$ [# H9 ]  e0 f( `" J4 C3 N, e
左边那个图是isotype，" d4 E( \. X, t, a2 F" W8 e
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......' H* W  j# D. L* ?1 F3 E
D0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了2 }5 l* I' Y5 U1 M+ V7 O7 M
我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚