请各位大神帮忙看一下我的WesternBlot实验结果是什么原因

木三阿凉

蛋白分子量较小，在 25-20kDa 之间，电泳条件为： 第一阶段 恒压80V 30min，第二阶段 恒压100V 90min 。转膜条件为： 恒流0.2A 120min。7%脱脂奶粉封闭3h，一抗过夜，TBST洗膜4次，每次10分钟。二抗孵育2h，TBST洗膜4次，每次10min。

2015-4-15 15:54 上传

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木三阿凉

回复 baby00000003 的帖子
" _& H0 ^' b5 A- ]- Z* X
. n0 }# s0 I+ B: ~没有用丽春红染~ 那我减少一下上样量

baby00000003

最右面的泳道转膜变形了，是不是混入了气泡的关系哩？) f" ]) y0 f& f0 X6 `* r
这个是转完膜用丽春红染的么？可能上样量有点大....

realyy11

用传统胶片曝光的方法试一下吧  效果可能会提高一些

木三阿凉

回复 xcf20305 的帖子
4 o2 G" S: J& c7 V1 h
) R( O$ _+ R( Q" L- \9 L好的，谢谢~

xcf20305

建议：
4 g! T$ c9 ?2 ^# K( S7 Z1. 重新做胶，胶一定要做好，再跑PAGE，这样条带会干净漂亮一点；, [% @: [) v+ I8 [# y
2. 条带不清晰，所以曝光时间过长，产生了杂带，因此建议缩短曝光时间；8 }: g: e: _. `* h
3. 杂带处理：增加洗膜时间和次数。
2 r" v5 ]* F4 L- _% C* C
) d  ]4 I+ Z& _! r) z! E

2014052

单抗自己做的还是买的？这种实验最好有多抗，多抗是各种单抗混合物，其中会有不少亲和性较好，所以一般多抗做出来信号会强些，那么通过调整一些实验条件，就可以让自己的目的条带变得很清晰很好看，从你上样量那么多来看，抗体质量很一般

木三阿凉

回复 beyond2008 的帖子9 A3 z+ p& l: j7 Z

3 [8 Q& o) N4 d8 N% s: |好的~ 多谢指点

beyond2008

小蛋白要用12%的胶，配胶的时候一定要混匀。电泳时，60V 20-30min 浓缩胶，80v 分离胶，时间自己看。然后牛奶封闭过夜，以减少背景。

121qwq

好难看啊，都搞什么了