关于脐带间充质培养的问题

hwlightning

最近处理了一份15cm长脐带，剔除羊膜、静动脉后，用眼科剪剪成很小很小一块，用组织块贴壁法做了10皿，培养箱倒置了2个小时后，加入3ml培养液。期间一直没管，第三天观察，组织块变得很肿大，而且有的已经飘起来了，不管了，添加5ml培养液，再过3天，组织块飘了一大半，也没看见细胞爬出来。又过了3天，把飘起来的组织和培养液都去掉，重新加入10ml培养液，到现在12天了，都还没看见细胞爬出来，各位帮我看看是哪里出了问题了？？？？0 ?" q, B- z+ f; M. Z
我分析了下，一个是组织块没有贴壁贴牢，二是培养液的更换时间问题。
& f& _2 Q$ F' B8 R* t# [8 c给位同仁帮我看看到底是什么问题？

wzs1985

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1 |! ?+ v3 K' ~2 N& f$ q4 L7 l想问问你们是用哪个公司的商业化培养基，一般扩增比率是多少？

Llxue

建议楼主可以换成培养瓶试试，倒置过夜，可以加点培养基在倒置后的瓶里，第二天翻瓶时小心轻轻的将培养基浸过组织，保持它不干就行，过三天再半换液，一般7-14天会长出细胞，间充质原代培养要有耐心，细胞爬出的时间不定的

阿秀哥

你换液的频率是不是有点太快了，一般脐带间充质干细胞都没那么快有细胞爬出来的

lyj-0017

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你好，同学！能否把你的酶消化方案分享一下？学习一下，谢谢咯

chrindy

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, C& {6 W" h6 x2 |* [多谢提醒！

细胞海洋

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( {2 l5 G3 N6 P, x+ R! s建议你发新帖提问

chrindy

请问各位大侠，如果要把剪碎的组织块放进培养瓶里面，大家都怎么放的呢？？我用显微镊夹又觉得很容易把平底刮花细胞不好贴壁，用枪头吸又容易堵枪头...还想问一下我要是种25cm的培养瓶要放多少组织块呢？？生长因子大家都用2ng/ml的bFGF吗？？

cjsbaicai

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4 b0 j6 R2 _" L# _' x9 c8 s' y楼主用的是物理分离方法，即让间充质干细胞从细胞块中自由爬出。但这种方法有以下几点需要主要：1. 组织块要足够的小；2. 种瓶的密度要合适；3. 倒置培养不一定是必须的。此外，少量组织块悬浮也是正常的现象
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791849046

可以选择直接悬浮法来培养呀  比贴壁法操作简单，每个培养皿里直接加入培养基10ml，3天半量换液，一般在一周之内就可以看到细胞贴壁了。