请教成体MSC如何培养？？

awangling

如题，成体MSC在外周含量极低，大家是如何做到纯化的？？利用MSC标志物流式或磁珠分选？？" t1 f! u% V+ w% j2 W9 I
看到很多文献讲肌肉干细胞、脂肪干细胞…………方法中与培养一般肌肉和脂肪干细胞一样，没有什么不同。6 y2 g, G- z3 `; Z
却写成培养干细胞，请教大家到底是怎么培养外周干细胞的！！！！另外发文章时，审稿人肯定会提这个问题，你是怎么纯化的（虽然你的文章没写过程）？？9 ^( ]3 d% O/ s4 g
最近我投稿碰到审稿人如此的问题，请教大家有什么好的回答方法么1！！！！！, k3 z& a1 X+ m# X! p( q$ e

luckyliu

培养过程中的选择性培养基
1 j5 p+ K: ?8 Y3 F) t培养后的流式检测

awangling

楼上，我也做了这方面的工作2年，光靠这个改善培养条件和选择培养基与血清，) J2 x9 K# g9 Q. B" j
可能一小点程度提高干细胞的纯度110 z) C5 E* p& ~- X+ c9 Q1 l
但还是不可靠啊！！远远不能称呼其为干细胞的！！
9 [: h- l5 k$ s' ?) ~自己都会怀疑的！！更说服了不审稿人！！

awangling

回复 luckyliu 的帖子- ]7 N) \$ p4 L, \" F8 z  z6 U

( Q* w4 l4 F$ ]. k, J! {4 S请问你就是按常规教材上说的方法和培养基与血清培养的吗？？？？
5 U6 K3 l% \' m你投稿审稿人提出这样的问题：你就是在培养普通细胞，并非高纯度的干细胞
2 Y9 z; }8 @2 B* S4 o) P请问您是怎么回答审稿人的？？

sdwzg119

回复 awangling 的帖子7 |9 w6 v& W, m2 Y- b7 l
: Q$ r5 [, R; o+ b7 [! w+ |( U9 E
MSC有它公认的鉴定标准啊.......................为啥非要专门的纯化过程呢？7 u2 j7 T) N  T
) C4 |$ O# {- X' [3 {
你就告诉他，MSC的国际标准是XXX；我得到的细胞是XXX不就行了？？？？

awangling

就靠你那个条件培养？？和非干细胞基本接近的培养方法，得到的就是干细胞？？只能说明里面有极少一部分干细胞罢了！
0 y  n7 q0 ]% A* K; Q8 Z* K流式鉴定，可以基本上可以达到SICT对MSC的定义标准，其实里面的干细胞并不多！！！！

yahooyeah

分化实验加表型鉴定能否说明问题？这个貌似是文章中通用的方法。

awangling

回复 yahooyeah 的帖子4 K( G9 U+ m( I/ u
/ Z& L+ A$ Y5 h& `5 P& w2 b6 D/ G) c
只要大量细胞中含有干细胞，那怕是10000个细胞中有1个干细胞，1个12孔中有10几个干细胞就可以做可以成骨成脂分化染出色来！！3 K+ C( t# E9 e. N2 D; T
我不是否认细胞中没干细胞，反证法证实存在有干细胞是没有问题的。
7 h! A7 [1 O, ~0 k我是讲普通培养的细胞中干细胞含量太低，目前这些什么培养方法，没有看出那个条件培养方法可靠，你不信你把什么肌肉、脂肪、椎间盘甚至软骨原代细胞直接诱导分化
( r( [1 h5 O( U( e* J也能染出极度少许特异染色来！！
/ Q% e" W( d( x; m/ r现在抛出一个问题，你讲就 那些培养方法培养的是干细胞，里面倒底能有多少个，纯度有多少？ 你讲只含1%干细胞的细胞群是干细胞？？合适么？
/ h6 r! F8 I" X9 J# R0 u9 [  h本人曾做过普通流式分选，稍高点能达到接近15%，可能是特异标志物不是非常特异，称之养的细胞为干细胞都很牵强。何况这个！！

yahooyeah

回复 awangling 的帖子
1 D* K4 E0 A/ R, ?2 ?# ?6 _) \1 O3 q: }
目前分离获得的间充质干细胞都认为是异质性的吧，不过可以用有限稀释做单克隆获取更加纯化的MSC。: ?1 q- L3 j" A0 O0 [* `% P' n
问题的关键还是在于目前对于MSC的定义不是很清晰，缺乏特异性的标记物，这个问题应该是困扰所有干细胞研究的问题吧，基本都只能从侧面来证明所培养细胞是否具有干性，而无法直接说培养的细胞到底有多少是干细胞。

awangling

# _: s' g/ z, Y% m

6 [3 u' \/ I1 d( [所以说问题就在这里！！除了骨髓间充质干细胞能获取不错的纯度细胞外！！; N0 V* h3 J2 O0 A, G
其它都只是经验化的培养，当在做转化医学或临床干细胞应用时，如何解决这个问题！！
; ?" v3 Q/ _5 R, o所称之的干细胞，其实就没有几个干细胞，和培养同源的普通细胞没有很大区别，' T" E9 K. T7 k% F4 r* U
或者称为肌肉细胞、脂肪细胞……还更合适些，这就限制了干细胞的后续实验和应用！！# L8 e" U: d; F0 l1 G
这一直是困扰我几年的问题！！！！！郁闷！！！