大家冻间充质干细胞的时候冻存液比例是多少啊？

听不到

我现在冻间充质干细胞，按DMEM：FBS：DMSO=7:2:1进行的，可是不管原来细胞有多好，或者放在-80或者液氮，复苏后都基本不贴壁，很久以前我用FBS：DMSO=9:1冻存的细胞很好，想知道是不是现在血清比例太少了，主要是血清太贵了...其次就是有时候偷懒，用的DMEM里含有1%双抗，有没有人知道是不是因为含有双抗导致复苏不贴壁的？

ltickp

DMEM：FBS：DMSO=5:4:1

田甜

4 d4 s+ M& b$ v0 U; K+ F# i/ g3 o6 L: |8 q- z# n
DMEM:FBS:DMSO=7:2:1，这个比例冻干细胞没问题啊，我一直用这个，细胞正常。6 ^% f7 T9 H9 N) N  f5 R% j3 x
问题可能要从冻存程序和复苏操作上找。复苏时，水浴温度可设置在39℃，尽量快点解冻，当看到冻存管内还剩绿豆大小的冰时，拿出来继续摇一摇就可以了。解冻时间长了，对细胞有较大的影响。

liuyanly35

血清可以再稍微提高一点点，再就是冻存的密度也都很重要。

ltickp

DMEM：FBS：DMSO=5:4:1，细胞复苏后活率基本在80%以上

bubble_w

回复 听不到 的帖子) k0 {" u" Q7 l, F& N9 |

& }! S+ z( L9 ^4 e! U" P/ p% N- [冻存液的比例不是重点，关键是冻存时降温的速度，在-20°至-60°的过程中，细胞内最容易形成冰晶，影响复苏后细胞的活力。最佳的降温速度是-1°/min。你的细胞复苏后不贴壁，有可能是细胞冻存的时候状态就不好，还有就是冻存的降温速度和复苏时的速度问题。还有复苏的时候，复苏液的选择、用量和温度也很重要。总之就是慢冻速溶。

sfnana

1）FBS：DMSO=9:1冻存，这个活率是最好的，因为血清中蛋白能够保护细胞，降低DMSO对细胞的毒害作用，所以血清的浓度不能太低，如果你想节约点，试试50%的血清浓度，最好还是根据你的细胞状态，做一个梯度对比，然后得出最佳的血清浓度比。
! d% c0 ~0 e/ q) B0 z: e) }6 Y2）保证血清的质量，最好选择进口的胎牛血清，这样你少加点，复苏活率也会很好的。
1 Y" I3 U. ^' Y" P8 k5 I% S3）另外，你还要考虑一下你冻存之前的细胞状态，这对冻存后复苏影响也很大。

风倾颜

1.我们都是FBS：DMSO=9:1冻存，每管也用不了多少FBS，细胞复苏的时候一直挺好的' y8 s) K- }4 w3 f3 `+ P
2.可以适当的提高一下冻存的细胞的浓度
% ?5 g5 H; C6 d. N# Z2 P% Q( N3 h3.如果冻存的时候要用培养基，不建议加双抗

LVXUEYAN1101

FBS：DMSO=9:1冻存，活率就挺好的，冻存液用不了多少，FBS贵点也就贵点吧

ltickp

DMEM：FBS：DMSO=5:4:1，冻的人脐带MSC，一般复苏后活率都在80%以上，冻存密度0.8*10E6-4*10E6都冻过，密度大点的复苏后计数结果好点