BM-MSC状态不佳啊

yiwuya007

大鼠BM-MSC，
1 c& C& W3 z( f: k+ ^  m2-3周大鼠分离，接种在高糖DMEM+10% FBS，第二天换液，大概5天左右，局部细胞密度特别高，尽管全皿没有达到80-90%融合，传代1:1，接种在低糖DMEM+10%FBS，传到第二代，细胞内黑色颗粒物明显增多，局部细胞空泡状（分化成脂肪细胞了？）。以前也是这么做的，还能养几代，现在才第2-3代就不行了，大家看看细胞是老了还是在怎么了？. O: s  z; i& \2 T, H9 A/ N
三张是在10x和20x镜下照片。

yiwuya007

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7 _+ t. C5 n# T. R! F4 R6 ]' _% v3 o# g# `2 H8 C* _# c; @
细胞这样了，还能做诱导分化吗？

yiwuya007

回复 watchen198891 的帖子
* G) B3 k7 q- s0 ?) ^* D8 \, {/ C. h
能具体说说嘛？你说的状态差是不是老化严重？
6 u7 E- K: c3 ^6 T/ l( X( H; F能帮助分析下原因吗？怎么改进啊？) J9 ~" u! M5 S* k) S( j
以前也是一样的方法，还可以， 不知道最近怎么了。

yiwuya007

回复 watchen198891 的帖子" T9 r9 Z6 r+ \/ y- Z/ n5 {) M+ U: j/ r
2 D7 b5 Z6 J2 a$ m) U7 o
以前试过一次15% FBS，结果老化很快：（

yiwuya007

回复 watchen198891 的帖子6 l3 m4 J' w; h' ~8 C. q( Q

: P3 R/ G* s3 @Hyclone的胎牛血清，没加任何生长因子，我一般都是1:2传代，传一次就可以清楚看见细胞呈涡旋状生长，2-3天就必须传一次了。不过，最近就是传不过2-3次。& d; \, h- v4 k

yiwuya007

回复 watchen198891 的帖子; X) ~& N) D4 i( X' P

! ]1 {3 e$ \* _" W没有拍照，因为正常生长的，所以就没有拍啊。7 s, d4 t8 F8 n' o
胰酶都是经过1：5稀释过用的，1-2分钟消化。
* Y0 M( W& w8 b  i细胞在两个培养箱中培养的，都变成这个样子了。2 s1 [7 K8 B2 v, a0 B( S0 N. V. j
现在唯一想到的就是消化过度或者传代太晚or太早？
# U9 _: _8 O8 ~) e  e  a5 H

yiwuya007

回复 yiwuya007 的帖子- U% G2 ~8 j8 v) T
( J  ]  @1 L6 W9 C7 x! d
这个是P0代的，以后的没有拍照。

yiwuya007

回复 素心无痕 的帖子+ e; Q1 e1 x4 q3 _  q) ?

7 w* l% z, Q  |6 t; h确实是在P1代时，有1皿密度低了，4-5天才长满，但是其他的还行，2-3天就长满了。现在是所有的细胞都这样了。

yiwuya007

回复 tess1029 的帖子' Y: Z6 b* L7 s( M/ q* f

" j* p% d- F- ?. g& F9 _2 d+ G2 `是老化了，但是不应该这么快啊，才传两代，也不知道这次问题在哪里。

yiwuya007

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/ h1 h5 Z( q: z/ S
4 K. C% _- E2 [( g4 E* j' u. n( z血清是Hyclone的，一直是10%