BM-MSC状态不佳啊

yiwuya007

大鼠BM-MSC，
% X: L' F# s3 Q3 Q7 Y) V2-3周大鼠分离，接种在高糖DMEM+10% FBS，第二天换液，大概5天左右，局部细胞密度特别高，尽管全皿没有达到80-90%融合，传代1:1，接种在低糖DMEM+10%FBS，传到第二代，细胞内黑色颗粒物明显增多，局部细胞空泡状（分化成脂肪细胞了？）。以前也是这么做的，还能养几代，现在才第2-3代就不行了，大家看看细胞是老了还是在怎么了？% q! d7 c; I3 C! d$ K; Y5 K
三张是在10x和20x镜下照片。

yiwuya007

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8 R6 T' p2 w+ U/ h8 e. @: p$ _7 B' h) a! W5 r
细胞这样了，还能做诱导分化吗？

watchen198891

这细胞状态太差了，老化也非常严重，不可以分化吧

watchen198891

胞内颗粒增多，基本是内含物增多，细胞状态太差的原因导致，另外空泡，你可以检查一下是否存在支原体污染。

yiwuya007

回复 watchen198891 的帖子3 |0 p/ J, n% X7 k

# r( N& Z& T/ p- }能具体说说嘛？你说的状态差是不是老化严重？
% k5 Q+ k4 k, F0 L, W# T$ N能帮助分析下原因吗？怎么改进啊？; `% K* \9 p8 c& s3 H$ h9 F0 l1 J) u
以前也是一样的方法，还可以， 不知道最近怎么了。

watchen198891

你把血清浓度加大一点，试一试20%，还有传代的时候密度不要太大，细胞尽量均匀铺在板子上，还有传代时间，要仔细观察细胞状态，不能让细胞形态出现分叉的情况，如有细胞出现该状态，就尽早传代。

yiwuya007

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以前试过一次15% FBS，结果老化很快：（

watchen198891

你用的什么牌子的血清？有加bFGF吗？这样说血清没有太大的问题，还是跟你传代时间以及传代时细胞状态有关

yiwuya007

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6 A: X% Y1 I3 f  A% W) |) WHyclone的胎牛血清，没加任何生长因子，我一般都是1:2传代，传一次就可以清楚看见细胞呈涡旋状生长，2-3天就必须传一次了。不过，最近就是传不过2-3次。: p) ~# _' n. u/ w+ Z3 n- I

watchen198891

涡旋状生长？给个图看看，你确定了你培养以及消化传代没有任何问题，就只能考虑细胞是否出现问题，我想你应该检测一下支原体，还有是否是培养箱造成的。