BM-MSC状态不佳啊

yiwuya007

回复 nkcell 的帖子5 N* T- p+ Q/ F7 ]. R
# A8 ]1 f4 [5 |7 L0 G" K
长的还是挺快的，2天就长满1皿

suning5

血清很关键。最好用血清替代品。另混匀培养，让子弹飞一会儿，长满再传代

小跑

看了照片，原代细胞就已经老化了。你以前做过，技术上应该问题不大。那很可能就要考虑培养基及血清了，会不会保存不当啊，比如反复冻融或者停电等原因。实在不行换无血清培养基吧，我现在用的就是，再也没有血清问题的烦恼了

倒腾细胞

好像原代就有老化了   传代密度不能太高吗？大家传代时都会计数吗？6 D; j6 ]# u3 E5 F4 _3 p6 i( R

yiwuya007

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) `; R! p9 P( S/ N, D: |/ o8 t原代就老了？这个我还没意识到：（
; \6 n" ~& n/ A6 D) g! ^0 C0 \2 r& A我也在考虑换无血清培养，能具体说说你用的哪个无血清培养基吗？

yahooyeah

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1 {2 w9 d5 t/ J! `; f6 f. l4 `
# h; d% Y9 r( j: v/ ^4 B( q老化，有分化倾向吧，这种状态细胞不宜进行后续实验哦

ganggangtry100

细胞相对来说还是很娇嫩的5 X. j" J2 L2 y; Q8 F
培养过程中要注意：
. ~  L2 d4 J1 s# j  X1、血浆浓度不要过高，10%是很经典的，过高细胞容易衰老；# i8 n* [. E2 t# M
2、MSC是群居性的，你的培养基中不加EGF、VEGF等因子，接种密度应该高点，这样细胞可以分泌生长因子，刺激自己的成长，如果接种密度低，细胞容易衰老
  Q8 e  L2 G, C2 J0 D: @3、如果培养基中添加生长因子，接种密度可以低点；
! h! Q4 r5 b' f0 F4 D4、接种密度高点、细胞融合度到达80-90%，及时观察细胞并传代，不能偷懒，好几天不管细胞，导致细胞融合度过高，也很容易衰老；- D+ ~- A, b) G0 H5 K- P
5、给细胞充足的时间生长，每天最多观察一次，不要频繁观看，会影响细胞生长速度；/ W1 l  B* P) C; N; u
6、培养基、胰酶平时存放在4度冰箱，使用前要预热。

倒腾细胞

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- _8 ^6 Q, G6 S% P
- O" R! \5 @1 M  R状态不好的细胞进行后续实验 结果会出入很多吗前辈  共培养能死完。

倒腾细胞

回复 ganggangtry100 的帖子/ W1 X" c2 y" v' T+ J

9 u0 b0 Y# W9 e* I嗯 预热培养基

lgs1

我觉得MSC长不好首先应该考虑血清的问题，我刚开始做用的Bi的血清传代后就是这个样子，而且越传增殖越差，最后都融合不了了，后来换了个国产的血清长的还不错，不过我现在的细胞在梭形形态下也出现了图中的那种空泡，以前我以为是传代次数太多细胞老化自发成脂了，因为我用油红O能够把空泡染上色，前面有战友说是支原体感染，这个怎么分辨呢？是血清造成的感染吗？