BM-MSC状态不佳啊

yiwuya007

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. |5 O8 u7 m3 B+ e& z0 t0 Y/ G
1 ]  g% I8 r( y* {' d9 S2 {+ B长的还是挺快的，2天就长满1皿

suning5

血清很关键。最好用血清替代品。另混匀培养，让子弹飞一会儿，长满再传代

小跑

看了照片，原代细胞就已经老化了。你以前做过，技术上应该问题不大。那很可能就要考虑培养基及血清了，会不会保存不当啊，比如反复冻融或者停电等原因。实在不行换无血清培养基吧，我现在用的就是，再也没有血清问题的烦恼了

倒腾细胞

好像原代就有老化了   传代密度不能太高吗？大家传代时都会计数吗？/ }6 e( ^  K2 ?  H* _

yiwuya007

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% f' }5 `, U1 d0 W( ~2 h0 {# k& k' Q原代就老了？这个我还没意识到：（
! j, O3 F$ O- S( j% D, g我也在考虑换无血清培养，能具体说说你用的哪个无血清培养基吗？

yahooyeah

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; ]" E! H* P2 ~: H2 K  w% t! }( ]. O9 G
老化，有分化倾向吧，这种状态细胞不宜进行后续实验哦

ganggangtry100

细胞相对来说还是很娇嫩的, v+ P, ^* ^; L: }
培养过程中要注意：
/ B5 q% S# e4 i1 \1 [1、血浆浓度不要过高，10%是很经典的，过高细胞容易衰老；
; j4 A, T+ c9 b1 j  e- H" Q5 A! m2、MSC是群居性的，你的培养基中不加EGF、VEGF等因子，接种密度应该高点，这样细胞可以分泌生长因子，刺激自己的成长，如果接种密度低，细胞容易衰老* E, l" A  ~- G+ r9 w$ h: ]
3、如果培养基中添加生长因子，接种密度可以低点；
; }8 p1 c: R- a1 N# V8 r# I, k4、接种密度高点、细胞融合度到达80-90%，及时观察细胞并传代，不能偷懒，好几天不管细胞，导致细胞融合度过高，也很容易衰老；! R! A/ q; p% e! d/ _& p
5、给细胞充足的时间生长，每天最多观察一次，不要频繁观看，会影响细胞生长速度；8 A9 j; h5 m6 R+ [
6、培养基、胰酶平时存放在4度冰箱，使用前要预热。

倒腾细胞

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: Q( Y0 O4 k  i1 x0 E0 t7 P. Q9 w( S4 N9 M
状态不好的细胞进行后续实验 结果会出入很多吗前辈  共培养能死完。

倒腾细胞

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* D: v1 Q% X8 Q3 ^6 K( J6 m- o9 P  ?1 @! @1 M$ A( W; s
嗯 预热培养基

lgs1

我觉得MSC长不好首先应该考虑血清的问题，我刚开始做用的Bi的血清传代后就是这个样子，而且越传增殖越差，最后都融合不了了，后来换了个国产的血清长的还不错，不过我现在的细胞在梭形形态下也出现了图中的那种空泡，以前我以为是传代次数太多细胞老化自发成脂了，因为我用油红O能够把空泡染上色，前面有战友说是支原体感染，这个怎么分辨呢？是血清造成的感染吗？