造血干细胞流式检测结果分析

nailute1985

1、cd133必要性不是很强，造血干的特异性标记就是cd34+ 所以用双标就可以了。- U  h, C/ T" b2 v
2、你用的是十字门吧？但是我们做造血干的标记的话是用的逻辑门，大体上是这样的：首先ssc／cd45设门圈有核R1，然后R1里面做cd34+／ssc 圈cd34强阳为R2，然后R2里面做cd45/ssc 圈弱阳cd45为r3，然后r3里面做fsc／ssc 圈弱ssc那部分为r4，r4就是结果。
! r1 L( q2 H% R3、楼主选的是强阳性的cd45吗？我觉得应该在cd34＋细胞群中找到弱cd45的 那才是真正的造血干，并且在ssc／fsc中也要找出ssc弱的那部分。

nailute1985

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0 Q6 w! y0 o) {8 Z6 i9 v+ U+ T  T1、你们是研究，我们是临床，所以肯定成本我们会考虑进去，cd133成本会高很多。其实绝大部分的造血干都会表达cd34，剩下的只是极小一部分" `2 c- g5 n; s" P% l. k
3、R3可以基本确定，R4的用意确实是为了验证这群细胞是否在淋巴群里，但是我觉得r4是很有必要的，因为如果你看r4的流式图的话，会发现r4的范围很宽，所以最后圈r4还是有必要的。不能全圈上，不太准。3 G$ ^: [7 {9 L& P2 R
4、fsc／ssc这个是必须的，无论做哪个标记。这个就是最直观的看三系分区的状态的。
+ H. E/ F! |5 B3 N5、其实十字门也不是不可以，但是对于逻辑门来说更合适，十字门分区并不是很准确，会有压线那种情况，不好区分。5 H3 ~) I0 o" D* J9 J5 _
6、这个是比较常见的状态，因为这跟你去红去的干净不干净，或者血液本身的质量有很大关系。

nailute1985

2、并不是cd34+和cd45弱阳，而是cd34+与cd45+的那一群圈出来之后，相对再找出cd45弱阳的那些。对，位于幼淋那片+ ~- m7 ]" k" G8 \
4、十字门在文献中很直观，直接就能看出来双阳或其他的，不像逻辑门，还得一步步分析，文献中是没办法解释的。
9 D- T& K, T# b7 _" Y6、isotype的话，很简单，不就是要去除非特异性的么，所以只要把cd34和cd133换成同性对照就ok了。cd45依然做阳性管
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nailute1985

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; ?. i/ q" m4 ^( k1 y$ _) ]) e- k! y6 l- V, U$ a' m$ w
你阳性管实验怎么设计的，对照组就把阳性管加的抗体换乘阴性管就行了。cd45不用换

nailute1985

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比如你阳性管加的是cd34 cd45 cd133的三样 对照组就加cd34跟cd133的同型对照 cd45不变

nailute1985

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2 O" C( V  R- u8 C1 @8 Z& v, h& ?3 U1 f8 w
cd45的可以不用加了。因为你去红之后留下的基本都是有核了，cd45的非特异性染色没有必要做，因为不可能出现cd45非特异性染色之后cd34还是阳性的情况了。实验方案这个应该是个商业性的东西了，不好发给你，望谅解。但是我可以告诉你的是cd45的isotype不用做滴。

nailute1985

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3 n+ s1 s1 x  D4 D8 T$ X1 B/ L5 h- R4 v! `. }$ f
难道你的阳性管没有调补偿就直接做了？如果已经调完了 对照是不需要调的 如果你调了，连实验平行性都破坏了，还叫做阴性对照不？

nailute1985

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; E" b- z" f: P$ H: g, e! i对 你是fitc跟pe吗？那你第四个不用调 123都需要

nailute1985

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) B( v8 S% ^/ [, S你一开始的阴性区的阈值就是用同型对照来调的，所以阴性管你就不需要再调了对不？

nailute1985

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7 S+ I6 b( {4 D7 }. q' p
是这的没错