探讨DC-CIK的培养

hyg5481655

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" d' B! t* L9 a
1 ]5 \' B* ?/ g& l谢谢您的回复，说一下自己的看法, j1 ]* I. F6 |0 S$ J) H/ P2 f1 P
1. 这份血样双阳率可以，但是我也觉得P1群外的碎片有些多，至于这些细胞碎片会不会引起病人不良反应我不是学医的不清楚。
/ b& w/ U( [* }$ j2 y; L, F2. 补充一点血样是健康人的，活力不会太差，应该是培养体系的问题，方法是经典的，IL-2的浓度我们打算分组做做看效果。我们的细胞密度在2*10^6/ml，细胞密度会不会有点太大？
6 e! {9 B/ W2 W  o5 U2 E7 x( I3. 有人推荐液体的高度在1.2cm以下，培养瓶加多点液体应该也不会对细胞密度影响太大。
; U6 @$ y0 Z* v7 k4. 加点自体血清试试。

yuanyecat

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8 b% n# ?6 Q& W( Z# N# ~
) W& H. o! C/ b. [! J+ ]1. 这个数据没有问题，一般CD3+CD56+所占比例超过30%，但是你还要看看CD4+CD25+的Treg比例是多少一般不要超过5%，细胞总体活率超过90%。0 q6 P* f, B0 c1 M) A
2. 我觉得没问题，重要的是DCCIK数目增加，你IL2的浓度是多少？
. n9 r7 B# p+ S3. 培养液不要超过培养瓶总体积的三分之一。
) y3 w2 h: m' y9 A" z1 e, q3 J8 P4. 目前来说，加自体血清的效果，DC和CIK细胞数目增殖远比无血清培养体系的好。

lyj-0017

回复 hyg5481655 的帖子" z8 r* Y" E4 j$ a  d
  S. P- a5 I! M& a
1、提高阈值对双阳细胞比例不会有太大影响，双阳比例能做到20%左右是行业的共识。! S" z6 F0 @) i6 b' V  y
2、IL-2浓度可以适当提高一些，500-1000U/ml较为合适，但你培养14天，细胞数量竟然比初始量还少，这点说不过去，你的双阳表型还挺好，不会是计数计算错了吧，数量级对了吗？
7 E! R$ h, \5 A3、细胞培养过程中是可以看出培养液颜色变化的，100ml的总体积不少了。
* }* X) B. f2 K( T' g4、加与不加血清肯定会对细胞数量有影响，但不会影响特别大。

lzlmiranda

1，这个问题很难回答，从双阳性比例上来说30%不低了，但是另外的那部分细胞占比还是有些大。
0 e. O$ Y  u, E: b8 w  L2，80ml的外周血分离出2*10^8的PBMC这个没问题，但是14天里面CIK一点都不长有两种可能性，病人自己的血液有问题，细胞活力不够；或者你的培养方法有问题，经典的培养方法第一天加IFN-γ，24小时后加CD3（OKT3）、IL-2,、IL-1α，之后根据细胞生长速度，补含有IL-2的培养液。IL-2的浓度不是一个确定值，我了解的从300——2000的都有，根据你自己所使用的IL-2的品质来摸索。: G) O- u; c4 x# n' I- W0 N- d
3，培养袋的好处一个是方便操作，一个是省空间，如果不考虑操作的问题，培养袋和培养瓶单位培养基产出的细胞数目上有差别，但不会有质的差别。据我了解，175的培养瓶加液到150-200ml 的情况都有，所以你细胞数量差距如此之大，不可能是因为培养瓶的问题。% {8 h/ T6 G" x
4，我曾经试验过用在无血清培养基里添加5%的胎牛血清做对比，效果并没有显著差异。另外重申，我做的只是实验，并没有进入人体。动物血清不应该进入细胞培养体系中。