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目 录
) p: }* k. C5 P6 `5 q% |! _转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii; V& A/ g, [+ j& z0 g
1. 简介 . . 19 `# z0 n8 a ?' u
2. 转染基础知识 . . 24 `0 }. d/ S1 p# U3 S h9 }
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 c1 j7 q4 I6 r8 J8 }) w
什么是转染 2
# Q% q* I" \6 V& N: ~+ _) D术语 2
) `& }7 k8 p/ R3 t% l* D应用 3
6 N: K4 ?! V2 m! v转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
5 @- ?6 r' D* k- C3 h z瞬时转染 4
( \3 v0 w! e; Z, s稳定转染 42 _/ R! X" o& R& h+ p3 J$ W4 N
选择转染策略 . 5
: H3 t9 R+ i. m9 A; a基因输送技术 . . 7
2 V c. |; W2 v阳离子脂质体介导的输送 9
2 p& X& }- z/ C$ c k5 ?磷酸钙共沉淀 10
# ~' T7 M& L: J" o' i5 _' x$ IDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11: c8 Y8 `- x1 W: b. I8 ]
其他阳离子聚合物输送 . 12( }8 o5 _3 m: ~9 |- c" S6 W
病毒输送 13; _# Z" B% j2 D2 Z/ f4 K) t* |
电穿孔 . 14 i- h! `* }+ G5 {6 h0 p: a
其它物理输送方法 . 156 z+ [! H5 q* I
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 162 W$ }6 Q& P; s' w* C
机理 16
, u# T& p" H9 c4 |$ ]阳离子脂质体转染试剂 . 17; X+ O7 ^- O$ D$ A% J; D7 |( s
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
: V" s x6 l) N; G; O病毒载体的主要特点 . 19
$ n3 ]5 j( a5 O常用病毒载体 19
; a$ Q. ?! p6 m+ n/ t( aNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
/ r* H$ E+ P- c' Z5 Q i7 s- l: [! W稳定转染子的选择 . . 23$ v ?) e9 X/ u0 ?$ F9 `
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
0 d. W- g' Q0 m. d$ f报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24$ f7 P& M# S7 I6 a# v! ]
转染分析 24
# q4 T! Z2 `- y. }! v" ^基因调控分析 25
' {, |. {; s1 q D/ B4 ]' Y" R常用的报告基因 25( w6 p& R6 W& u8 N. T5 G% l. x' a
RNAi和非编码RNA研究 . . 26
) ?; u2 p! o; [% d- Z常用RNAi术语表 . 26
* h5 c- A5 Y: U7 _5 O$ ~# oRNAi工作原理 . 270 y7 q/ l- Q/ ~4 ? ~( J
siRNA分析 . 27- ?2 r' `$ z n0 U4 y M
miRNA分析 28! e; v9 j8 Z" [0 T+ W: @7 O
选择RNAi方法 . 29
" Z0 b9 v$ ]; a+ {7 f" ]- @- o3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30" p7 s* m6 V6 K W7 N3 A9 g
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
" M/ x+ ?; n; o w细胞类型 30
0 X; N& j2 R$ I2 H* i% Y细胞健康与活性 31
+ N6 [: q9 s8 `5 D+ r6 Q汇合 . 32 F8 U' w9 t/ O0 b4 {
培养基 . 32
% ^0 a4 o1 z: H7 e1 m7 {血清 . 32% |/ {9 S- X2 {. ~* z k
抗生素 33- C- S& ?8 k& Z+ L& |0 G, m& ?3 V
转染分子的类型 33
. g% h8 r- D T' p转染方法 333 M+ U0 H& f( c9 I# I( z6 K5 [* ^
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
! r' m4 O; D, m% ]- v* G5 b连续细胞系 . 345 r. J) z- d- v* @
原代细胞和有限培养物 . 35
3 a1 _& G6 u4 b选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
8 H6 Z, x# f- ^; C3 Y哺乳动物细胞表达系统 . 369 a, j( K" ^3 c
昆虫细胞表达系统 . 37
4 `4 r, b8 G1 Y, L" M( ~( }# x0 y质粒DNA转染指导原则 . . 38; Y5 x9 p! ~( Y6 c- ~! F
载体考虑因素 38
# ?- {6 s, T0 e7 F' ^9 i$ y" S% z质粒DNA的质量 38
, [/ a' ~% F- n) J; b, {9 I基因产物和启动子 . 39
( q; i% Y" Y( K1 h对照 39
2 Q5 n; ~/ x' E- {# O; t质粒DNA转染的优化 . . 390 t8 p- z$ T5 {0 N
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40 X% a6 _7 i5 f0 s! S% E
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
) |) b8 N# w4 ^电穿孔的考虑因素 . 43. T* | l5 Y8 d# g
稳定转染子的选择 . . 44
, ]" Q# S9 Z" c2 O$ E开始前 44
' c) R- u O; [4 t" {杀死曲线 44
; ~: y& I1 u/ r- F" W x( a3 g选择工作流程 44
3 t4 ]$ v+ d5 N0 m; {9 [8 Q2 I选择RNAi策略 . . 46( n1 Q6 {# i e, C& M F/ T
siRNA与载体方法 46 R+ r. ]4 H' h) A/ l# c
非载体siRNA技术 47
% k& \+ X, v' ?1 fsiRNA转染 . 49
8 V- X1 z. z/ L: X6 K+ Y载体介导的RNAi . 50
0 O( S' s2 v5 I/ k4 a+ Z+ [' ` C$ ORNA转染指导原则 . . 51* N+ z3 v4 [) P* c% c: X" L
RNAi工作流程 . 51# f; Q- W( F. Y% a$ X
RNA处理 52
5 c) j) j7 y! K: H转染效率 52' j& K$ o, t# ?1 d% F/ S
阳性对照 . 52
, i! g' a/ @% A/ h. d; e+ U8 a- c阴性对照 52
& D6 {: x, V" Y4 ?4 t共转染 53
/ m- Z% W0 M: d9 a# tsiRNA质量 . 53
* M& x0 ]( t: Z* T" S" psiRNA用量 . 548 r+ h" e$ H' l
转染试剂的体积 54
. X4 j( P( c" V7 U: S* t; P细胞密度 54* O) K: s$ x, ^1 G! j) P7 c5 [3 `
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
6 `- d* A# E- `3 u9 A1 |转染过程中存在血清 . 55
! v- w5 H/ p( H0 X! \' ZsiRNA实验成功的技巧 55
6 L5 Y3 g4 }" A( {! D7 G8 C. usiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56* @7 v4 v. p: }6 j! w
影响siRNA效率的因素 564 }2 _! q2 r, o
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
2 C7 q6 _! m5 d* ]5 c4 Z转染产品列表 . . 57
6 o: }0 D5 p3 }) z转染试剂 57
' T: I! v$ f) \% T: QNeon®转染系统 . 586 M; M6 `; ]; C$ H$ S F% P9 `
RNA干扰 58
% l9 \' T! G) Z; C C参考文献 . . . 59
/ a* J5 }/ Y( h- I N8 n |
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发表于 2015-7-9 09:28
