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目 录
1 E" w3 Z& ~& ^. Z1 n' X k转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii8 U' e7 e; P6 c. n6 g0 [
1. 简介 . . 1' q6 a1 d7 l" D' u
2. 转染基础知识 . . 2' h% {$ m1 O, D# G6 V. s
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
+ ^( T9 f6 O" z# Y" p N$ v什么是转染 2+ m9 U; v4 n7 Y# U6 r
术语 2! y9 V# A$ J4 E2 ^
应用 3
" R/ Y0 S, A" p/ k: P) s" u转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4# f. B5 {- q1 M( t M! |* w
瞬时转染 4
5 u) z. K Y% x9 Y; u' b @) j稳定转染 4% e/ F v* l$ }* M4 |$ _
选择转染策略 . 5
T- o% V; S2 Y基因输送技术 . . 73 d1 g: l$ h5 T9 L6 D, o2 i) a* Q- h/ d
阳离子脂质体介导的输送 9& ? p! @3 @0 Q8 \6 H1 s' f% P: S
磷酸钙共沉淀 10
, s/ v5 k g5 O* A( c' T1 x' zDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
/ X d! s q4 Q9 H# C, s1 e其他阳离子聚合物输送 . 129 A* W6 z6 o0 K7 `# c1 q
病毒输送 13( ?5 Y" e, R3 O: n6 X
电穿孔 . 144 l- k; b b- }/ z: |
其它物理输送方法 . 15
! v& a" ~$ n+ j3 e8 T3 M阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 169 H6 v, Y; a- g
机理 16" H* M/ G8 |9 m1 t# H4 U: z; |
阳离子脂质体转染试剂 . 17, F7 i, L; y1 j; o
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
% Q$ \$ `2 h: U. S& p病毒载体的主要特点 . 19
! a H, V% `7 X2 ]0 N: E常用病毒载体 19
; ]) G+ D! w" v5 INeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21% v1 p' J" ^8 M1 h1 M7 @
稳定转染子的选择 . . 23* s k2 ?" _ f
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
( i7 \) a, @. |3 x* s( C+ ]- H报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
; w* J9 _0 q5 G c0 ]) Y! h; C/ g转染分析 24
) G. r- j9 X7 a! }2 B5 U E. z基因调控分析 25
! f5 J6 B9 \+ Z/ j. b& b" k5 Q常用的报告基因 25
( Y) c, ^! Z6 \3 J: ?RNAi和非编码RNA研究 . . 267 n; M' n: }6 b2 `! R. E4 y
常用RNAi术语表 . 26
6 I* v2 q: ~6 A0 U# M- lRNAi工作原理 . 27! @- V" p/ I: }, I
siRNA分析 . 27+ Q1 I9 v [1 i' B2 l! x' {$ W
miRNA分析 28: M1 e+ m. H% Q5 K
选择RNAi方法 . 29
- R* V X. e( y0 s5 ~% t) Q3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30! @ M; H1 Z6 @) B( L) F, s
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30% r% }. V6 ^4 ~
细胞类型 30, ~( w" |# _7 y" C2 K
细胞健康与活性 31
- d7 G$ S" u( e汇合 . 32
! f1 p; P" j% _3 X$ \培养基 . 32& ~) Y# S) N. z) t. H
血清 . 32; N2 W: _( ~7 q7 g7 }! V( i* H
抗生素 33
1 V( _ e1 A5 w/ l% p转染分子的类型 33% K5 V9 i, i0 f* q9 w; U+ s
转染方法 33$ e+ x! W F A0 `: h$ f
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
! V- W$ Q% |8 V7 K7 @+ P9 W* r2 U连续细胞系 . 340 S' |" b1 K, `' G! r* m. K R
原代细胞和有限培养物 . 35 P. v* {* Y' G% ^3 N
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
: T! b4 k! `+ ^4 t哺乳动物细胞表达系统 . 36+ S) r* j# G( l5 i
昆虫细胞表达系统 . 37
: k; Z) h4 ]4 }! Z7 A: s质粒DNA转染指导原则 . . 38+ Z$ C3 [, E- F7 ^5 c* K- R
载体考虑因素 38# u/ x4 [# \. b# q
质粒DNA的质量 38! [ L+ n9 k* u( P$ U5 B1 ]+ r
基因产物和启动子 . 39
{% y9 Z# s$ F. h+ x对照 39
. @$ ^6 A; P4 ?' F l质粒DNA转染的优化 . . 39
( T% I* x: I8 f* \8 `磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 402 _$ m# f1 H- t: _9 ^1 {
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
( f3 g }1 R5 i电穿孔的考虑因素 . 43
# y% b5 `8 M7 C! }7 \- t6 w稳定转染子的选择 . . 44
/ W1 U/ v6 }: G. |开始前 44
7 y% N3 X6 L7 ]. [4 r6 T杀死曲线 44" J! c' b- ^ B" p" N' m, O
选择工作流程 44
7 I2 {; o9 d; v选择RNAi策略 . . 46+ Z' f3 ?5 c3 u7 f: `' Q3 n
siRNA与载体方法 46
9 x: U0 d' T% y) Q/ \2 _3 b& P$ a非载体siRNA技术 47
' K/ \+ b) m" ZsiRNA转染 . 49- y6 l# ~& D7 s3 {1 k& b& J
载体介导的RNAi . 50
3 a* f2 F; u& I4 m2 H5 a9 RRNA转染指导原则 . . 51
% G M5 a# W9 TRNAi工作流程 . 51
+ h$ D" A, Q* k" ]2 D/ `; s9 ARNA处理 52
+ T8 M8 N+ m1 }; }# X2 R9 Y转染效率 521 J' r+ I& C0 v2 |; e- i8 b$ p0 [
阳性对照 . 52( u8 F8 s" U3 p( K& q
阴性对照 52& k/ k9 S9 I8 [" J% K
共转染 53! V! P( j- n: q0 h3 a
siRNA质量 . 53
( w0 o+ w# T- q5 i UsiRNA用量 . 544 S9 m( L8 R; B. @* @6 u
转染试剂的体积 54. z, n& q" n e3 Z( B5 U5 I. P2 r
细胞密度 54
2 i0 S% c2 q1 u8 T5 F( ^暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
; H: b( z3 i& D) b/ C0 ]; u* e转染过程中存在血清 . 55
; Y6 K8 N7 w1 t! p: gsiRNA实验成功的技巧 559 S& u; q7 N, x* h& u# U4 w
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56
4 O& P* [. \6 o影响siRNA效率的因素 567 J' F1 A2 q9 D* f- m6 x
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
5 z, m: W+ M2 b% S. C7 k转染产品列表 . . 57' l! }) i$ e) |6 k h" Q5 U
转染试剂 57
; b, M: r% X" s! r9 B* UNeon®转染系统 . 58
. k+ C* S, @& ~RNA干扰 580 k5 n6 N5 v# Z) S
参考文献 . . . 591 B; q, Y/ z6 R( K U3 E- p
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发表于 2015-7-9 09:28
