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目 录' k9 l f4 ~/ h/ v
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
; o! a3 x0 x8 H1. 简介 . . 1; V4 s% a/ r" T; A
2. 转染基础知识 . . 2
& G3 h: Z% |3 w9 `* `1 s转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
4 s5 k2 \: A+ `* B什么是转染 29 k% k1 N2 a0 X9 v# j
术语 28 s/ v$ g! _% f! A9 B4 E: d" {* f5 }
应用 3" X9 e4 i+ C2 \" D, |
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43 @3 c& c' o- m( p$ n! Z5 k
瞬时转染 4! y+ l0 ?3 q B& z
稳定转染 4& D, l6 X X% j1 M! t5 h; |
选择转染策略 . 5
7 ?. U. n; { k5 D基因输送技术 . . 7
$ d1 {; G* [! n: ?2 I阳离子脂质体介导的输送 9
% p( E: n5 _5 S& P磷酸钙共沉淀 10
3 o4 s6 U- {' E. O7 J/ W8 nDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
& i& p4 X5 I4 I2 k/ [其他阳离子聚合物输送 . 12
" a0 K; ^3 z0 X2 o" z9 B- w病毒输送 13
/ k/ l- N6 z2 G, Q0 \电穿孔 . 146 k4 p; e/ f+ I; d3 _3 b
其它物理输送方法 . 151 Y! Z6 M0 [0 {: r. O- }
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16$ ]! c+ R& t& V" M( o& q
机理 166 U- F7 F$ D6 X. D
阳离子脂质体转染试剂 . 17- K: S. L$ X3 f1 `+ ?4 o
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
( e. _9 {0 a! f2 L4 w& }" ^3 p: w病毒载体的主要特点 . 19
. F. K2 u1 D( [5 g常用病毒载体 19
7 U& a$ i4 a8 Z7 u! S2 O+ I8 LNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21& F; n: z) u X/ c) ^0 T2 |/ P
稳定转染子的选择 . . 23, d I9 L( i; F( ] z' w6 U
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23 {# Y! `2 l: Z, P: b8 Q
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
1 W" j K: C+ J; K7 w转染分析 24# h* i2 J( k: B& o! F( e
基因调控分析 25 }: P- ]4 r* ]
常用的报告基因 25
" h) c2 g" q$ URNAi和非编码RNA研究 . . 26
7 W( i7 c) S) j1 s4 j常用RNAi术语表 . 26
" o, q! b1 g* f( | I! KRNAi工作原理 . 27
0 [: I$ B3 Y5 |siRNA分析 . 27
+ x/ G& u8 ^ q, X6 Q" u2 b! gmiRNA分析 28
K" n3 W) v3 c6 ^9 q" g3 p: `选择RNAi方法 . 29
) q1 a9 c8 G: o8 D3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
, a7 x& W$ k" @影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
1 i3 o5 O- z% ^细胞类型 30
# T/ _' R5 s) }4 B细胞健康与活性 31
+ {/ j& o5 f0 P汇合 . 325 V! _9 N- i0 O8 ~( U
培养基 . 32
2 |" }/ o) v# x6 x血清 . 323 @8 |6 \* Q$ E- s! A9 y" y: i
抗生素 33 `; F) p# w( _: R
转染分子的类型 33( C5 X& s, N- y! c' Y7 ~
转染方法 33) X( Q* S' M% U- [: p
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
, S3 L( K$ g' k+ A/ H$ X连续细胞系 . 341 u1 I+ \( i& p; q; k0 p
原代细胞和有限培养物 . 35- P2 R( c3 [4 a, S9 `& E; K
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 360 [5 q% M! [3 F+ |( N& M* f8 _
哺乳动物细胞表达系统 . 36
/ |; |0 u) z4 E' Z昆虫细胞表达系统 . 37 G% l/ J1 P5 H" f, q
质粒DNA转染指导原则 . . 382 L8 V- S. R! H. b6 F( S6 k+ y5 b
载体考虑因素 38
* l: ~) Z) F! i6 _! M0 b# e% Q8 H) A质粒DNA的质量 387 p L2 s1 L$ D/ f
基因产物和启动子 . 39
8 Y1 h0 }0 M% F' g对照 39
4 |* V% h! ]; q9 |$ c9 I- b( ~质粒DNA转染的优化 . . 39
. |1 A$ R. E* u磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
F( r5 b4 R2 G; s阳离子脂质体介导的转染考虑因素 415 d0 K" T5 w& T0 W/ X
电穿孔的考虑因素 . 43' o# h% w' H% N7 z
稳定转染子的选择 . . 44
+ C/ i( e, @$ r( s开始前 441 t) s8 F0 \# G8 Z- O6 f
杀死曲线 44
2 Q6 u2 T# Q2 l6 g6 q6 F8 i$ I选择工作流程 44 s$ M# W& }: T7 |& ?5 [1 `
选择RNAi策略 . . 46: e+ H% i+ w$ N5 @8 }( O; k
siRNA与载体方法 46
7 y, u* R) Y F; T ?8 H非载体siRNA技术 47
, q1 a# H' m! c+ z- H8 psiRNA转染 . 49: A0 T: l. [" @2 I8 U
载体介导的RNAi . 50# R4 i( y& @1 w* b3 O
RNA转染指导原则 . . 51
* M, q8 L( n% y' iRNAi工作流程 . 51# y& ]( p: _4 D$ W! F
RNA处理 52
% W1 b# ] v6 O转染效率 52
7 u# M1 e, D% O* Y' {阳性对照 . 52
8 p [& h- j* [: F阴性对照 52/ e/ l0 F- t' M4 U: q! l. `) ^3 y" k
共转染 53
: c5 d U; u$ V+ c9 O; k1 isiRNA质量 . 53
# j+ E: g+ l# D0 XsiRNA用量 . 54) b7 Q5 d1 Z$ |% n& f1 @
转染试剂的体积 54
+ i) Q4 u1 V, V3 R细胞密度 54/ t, R8 h# Z8 _% z7 y' e
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
3 k/ ^8 X9 z" v! ?7 e' a+ B转染过程中存在血清 . 55
. O0 }( p! V. N3 W9 ` TsiRNA实验成功的技巧 55: S$ J5 X v6 W" G6 R$ |
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 566 }9 T) R- w6 R& g" m' w; W8 `
影响siRNA效率的因素 56
; Y2 }6 F, D& X9 S* u- D附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 574 f" K! V! N: ^, T- `: D: d* Z. w) \' _
转染产品列表 . . 57
# r8 m4 x* b* B) ?转染试剂 57
( i3 F1 ~2 h2 M& q8 u+ rNeon®转染系统 . 58* T z9 j$ D" w3 ^' F4 K
RNA干扰 58 D6 J- }. L, P8 H+ m( u0 B' r/ W
参考文献 . . . 59) p9 a0 a- V. b5 [
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发表于 2015-7-9 09:28
