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目 录5 i; `1 @" N" q1 X6 o& ]3 N, Z5 {* @; y
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
4 v6 e; S" r% B( p& |7 r9 t4 N% Q8 i7 x1. 简介 . . 1, J2 I- L- {4 t% E$ C2 A( e
2. 转染基础知识 . . 2
! r9 n' U1 A j& j% @转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
1 X: f4 L: f1 `& r% ?什么是转染 20 E$ P9 ^4 g! t3 D+ f. Q
术语 2' c! N( ~9 H2 k/ M4 n# A
应用 3/ W/ L6 N L) j4 p
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
1 n5 K: n! }" B3 K瞬时转染 4, q- ~% P! f7 \; J, y
稳定转染 4
; X: H$ m9 K6 s/ @+ C5 s5 N4 U选择转染策略 . 5; \7 Y: F9 |* ^0 s+ B
基因输送技术 . . 7
8 I3 k" g, p1 D; O阳离子脂质体介导的输送 9. ?' ]7 B$ L8 P% w7 V
磷酸钙共沉淀 10
9 D; Q! F9 k L; ]8 E+ KDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
6 L$ D5 p8 j+ B7 C, r% M2 i9 N其他阳离子聚合物输送 . 12! P5 G$ U6 ]% J$ U2 w
病毒输送 13
/ R* z4 X3 [, H) X& S电穿孔 . 14+ t) }2 }( U0 q {% {0 A8 a: [
其它物理输送方法 . 15
3 i6 a! p! u3 v8 H; J3 }阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
7 Z) `) Y. [5 F. {" f* D) ^机理 16+ U5 j, Y& m. s
阳离子脂质体转染试剂 . 17
" d' K2 [' v( C7 c' w/ ^3 b- o病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19/ K( l& G3 ^( O/ `
病毒载体的主要特点 . 19/ u( S0 C* P7 A& D* ^2 b0 Z& L! A
常用病毒载体 19
! M! t5 F; _% T- P8 XNeon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2 F% Q. i9 q) [) L5 |0 z' k稳定转染子的选择 . . 23
) y/ j9 D7 _0 X用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
8 P+ Y4 x2 y" m% E报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
; w' {9 U' G( E# a2 y6 U- I* ]8 q转染分析 24
4 \ _9 D: C; C基因调控分析 25
/ l8 i* [8 b5 r. V8 l% N常用的报告基因 25( ]- g6 |1 L- G# X5 }: R/ d
RNAi和非编码RNA研究 . . 262 H/ U% D; Z& x3 w" e
常用RNAi术语表 . 26
f0 P2 x! i6 s9 @+ h4 f* h6 SRNAi工作原理 . 27
/ Q+ ^, q1 D; s c: zsiRNA分析 . 27$ n! A, T$ t$ S) ?, e# C) k
miRNA分析 28- S* ~. ^1 C, A$ E+ u1 v3 i$ t
选择RNAi方法 . 29
' Q, L2 s: \3 v# m2 T9 E2 _" y3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30' ^1 C) X' K W% [/ J6 i
影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 303 m T" |9 q7 K! O
细胞类型 30
+ V: Q+ x9 g! c( {$ F: e细胞健康与活性 31% e3 r4 |: n0 f
汇合 . 32" }" ] u8 Q' T3 W
培养基 . 32
6 ]- z7 x8 g0 H血清 . 326 J) J' ^$ K: K% N
抗生素 33
$ |. m, |: ]2 b2 w转染分子的类型 33$ m9 R, E; b- a$ {7 y5 v2 u/ c
转染方法 33
. P6 S8 v9 j5 d% w! z( _选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34, \8 _0 t& I, b% ?% b, b
连续细胞系 . 34% N$ y8 [$ e; G- l; f/ P" {# L. W) V
原代细胞和有限培养物 . 35
$ r- `; W* o) T/ P E/ Q选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
& {: B2 T( O" A9 @: c哺乳动物细胞表达系统 . 36; j1 g& P# u+ G/ k7 p
昆虫细胞表达系统 . 372 Z# s* y: H& t1 [% L8 a( S
质粒DNA转染指导原则 . . 38' m. ^1 Z7 z2 f2 ?
载体考虑因素 38
- g6 [: P( E4 F+ ^质粒DNA的质量 38 n' B2 B6 F; w6 o' v/ b
基因产物和启动子 . 39
6 E- @6 I- t3 o/ X对照 39
; B3 o8 A. g2 ~7 F# d! `3 K) E质粒DNA转染的优化 . . 39, T( }: o& f. |" Y! T2 ~0 ?* d, s
磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
% D# W# v: s0 q% E阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41
; l' C% m0 b* F; @电穿孔的考虑因素 . 435 _( x8 w ]: w, \0 h' P2 o. I1 V8 }
稳定转染子的选择 . . 44
+ H: h6 Q; \; b6 ~7 a开始前 44
7 i8 L: V9 N9 ]杀死曲线 44
( c$ q( i, q" f! d- ]7 [: A选择工作流程 44
2 ^7 l V# c' h. A选择RNAi策略 . . 46
: s8 b# @# G/ I5 g" _siRNA与载体方法 46
" T- v( b3 u9 O; i非载体siRNA技术 47
& t7 j+ ^. o& T G* V# ~# RsiRNA转染 . 494 V- w$ ]. w3 ?* _8 W
载体介导的RNAi . 50, k" ]4 g2 j9 _/ H/ j' [0 L* m8 {
RNA转染指导原则 . . 51 W' ~- t. L, A' w
RNAi工作流程 . 51( \3 t" ?: R& w' B
RNA处理 52! D3 {" c+ q' [9 [. Y
转染效率 52
# U( v) j( s, Y阳性对照 . 52
- q) {+ ?1 s$ y$ l( y阴性对照 527 R7 }4 V, l" D& D+ ?3 p6 }
共转染 53' X% O% p @6 o* m W
siRNA质量 . 53
, h8 P+ R" L6 BsiRNA用量 . 543 ~; j; }/ {0 m( [" c+ @* v
转染试剂的体积 54
% i( z1 `& S* ^' N/ ?6 O细胞密度 54
- k4 k: g0 ?0 U6 f- r1 c, N. X暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54% s" j0 x7 i! t6 v& _
转染过程中存在血清 . 55
! k/ Z$ a* L2 E4 Y* B" ~siRNA实验成功的技巧 55
- |* I5 `2 x* t) E! wsiRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56. I* s! @/ o) V6 i% Q7 [
影响siRNA效率的因素 567 `; i/ B8 l5 R9 Q; U1 O! S
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 577 g2 K, @, A; D4 y% l
转染产品列表 . . 57. j& S# Z G, q2 `8 U) u: z
转染试剂 57" f* l5 T- X" y
Neon®转染系统 . 58& X$ a3 F4 L" b6 K5 _3 ]; o
RNA干扰 583 H. ~9 n4 w* w; { ?0 f
参考文献 . . . 59
0 p3 e( X E7 a; W( _* q3 M+ i/ R |
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发表于 2015-7-9 09:28
