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目 录
0 K& S2 ?/ a4 C/ L2 [转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii, }$ ^3 \1 N6 G& Z, m
1. 简介 . . 12 }1 K" G7 ?; k* H" Q: T
2. 转染基础知识 . . 2, p% ?# w; m' E* e$ k h0 H9 z
转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2+ R' i7 i0 o& ]
什么是转染 2# _% J0 W) ^% v' A; K
术语 26 e6 W6 o$ `' q- ?/ W8 Z6 j
应用 3
$ c0 _, ~7 A7 w3 q: X$ Y* o转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
) d- f+ o7 ?5 R瞬时转染 48 y* {; t9 |( r6 z/ N# o
稳定转染 40 w0 f, V6 V3 [
选择转染策略 . 5( v5 G, r5 U5 ~
基因输送技术 . . 7
' k5 C% O6 x8 |) g' C阳离子脂质体介导的输送 9
! R# V3 _8 H; y6 O0 [8 K磷酸钙共沉淀 10
- B1 a/ l* @, J1 l. aDEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
; a8 o8 |! S! i. a% H7 H3 U其他阳离子聚合物输送 . 12) R" b# Q3 I7 B1 C" ?* b
病毒输送 134 N& x# N4 O! u8 K
电穿孔 . 14
. Q" y# ~4 [1 e$ ?) g' R其它物理输送方法 . 156 x. x- | m" h& v3 A
阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 16
( n( {; l" {+ _/ u3 @1 ]: z机理 16& m) E8 J/ H) Q( y
阳离子脂质体转染试剂 . 17
9 i7 m& K& Z# b病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19
( k: g* ]. y$ Q( _$ E3 z* u病毒载体的主要特点 . 19
, h0 Q3 v6 r# f! n9 x& H常用病毒载体 193 N, v' u3 A9 X# n5 ?4 C* l& E. h
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21: X& R( c. y' B& z4 {0 Q$ B3 d
稳定转染子的选择 . . 233 |& n# C% v2 _1 c4 P2 b
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23. D2 \6 A3 d4 e2 Y: C3 b& h
报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24. d4 \2 N+ A7 J6 e2 K. g
转染分析 24
( Z2 }0 L: D* D: ~, U基因调控分析 25) i, W; O. F% @* U4 Z5 h1 B, y
常用的报告基因 25
6 B9 T# ~- ~. GRNAi和非编码RNA研究 . . 26, Q. i. F$ Q* i1 y/ D
常用RNAi术语表 . 26
% s8 e8 O9 z) lRNAi工作原理 . 27( h$ b4 K$ f9 q3 q6 H7 M5 z/ `
siRNA分析 . 27
0 ^" o/ V. J/ V% L+ X5 [& R6 bmiRNA分析 28
, A/ o) U h7 i. _$ v7 U% O选择RNAi方法 . 290 k8 Y6 ?' c5 V, F. ]$ t
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
( a4 I/ L+ G& \' p3 [! Y影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
) p* w. x: M ]6 {% S" o5 O细胞类型 30
- L' m1 F, t& G细胞健康与活性 31
3 z0 N( c& k+ [, T6 q汇合 . 32
& [5 N/ ^5 S6 n4 u/ N4 v培养基 . 32
. j8 {* V9 o9 o: w8 q0 N血清 . 32
% `* T" i) d9 _% z1 \6 |( N. {& b1 W抗生素 33
, W, p" e1 K8 N6 W转染分子的类型 33
2 [* N3 g1 B) M- I转染方法 33* u+ u/ p3 n" ]2 @5 @
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34$ M- s& k0 M: j( R+ O, E
连续细胞系 . 34# @& p$ J5 H2 f! l3 l
原代细胞和有限培养物 . 35% I5 |+ s+ B+ F% c
选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 369 y) l7 j- u# O
哺乳动物细胞表达系统 . 36$ c6 a% Q4 e/ p
昆虫细胞表达系统 . 376 D1 G6 r. P. I \
质粒DNA转染指导原则 . . 38 c R; a0 ^( i$ d: I) o8 B
载体考虑因素 38
P7 Z# P1 k5 v7 j. T5 t o! o6 |质粒DNA的质量 38
5 t( Q0 b% }" L8 x基因产物和启动子 . 39* z7 ^ b0 O; y- I' c7 v* z2 Y
对照 39
2 L1 S" V$ }; z0 Z: f质粒DNA转染的优化 . . 39
$ L' Y& {2 E( `5 W' H4 W- j磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40
( v& Q! V! f$ L, ]阳离子脂质体介导的转染考虑因素 41; O+ a+ I; _$ o9 H) B
电穿孔的考虑因素 . 432 o" @) A2 ]& n7 A- r1 A
稳定转染子的选择 . . 44/ L! [* o/ L$ J
开始前 441 k* F( G4 u: `
杀死曲线 44
7 B" x; X2 W% V* {" `1 J选择工作流程 44
/ {4 M: `! l( Z( ?/ X选择RNAi策略 . . 46' `1 R+ a: p/ r, @: r3 a2 p1 B
siRNA与载体方法 46- l6 Q0 U( Z% l8 }) l
非载体siRNA技术 47
( I m. R7 l1 rsiRNA转染 . 49( H7 T3 I/ S T/ }. I* R1 D9 }
载体介导的RNAi . 502 d: d0 G$ |$ D6 e/ Y
RNA转染指导原则 . . 511 g+ N. l6 e- Q2 \- h" y3 L
RNAi工作流程 . 51
4 K0 a0 D( T; m# }3 D PRNA处理 52
- d/ ?5 q9 J, S* I0 L6 P转染效率 52
2 U; T( b& W4 B/ k4 c3 F7 i阳性对照 . 52
- Z, a* s4 M4 |9 R% O N& p) z阴性对照 52
/ U& j ?/ h7 d3 F8 c8 k共转染 53
0 c( Z7 p. g7 U( QsiRNA质量 . 53) ?) I# \% z0 Z4 b; w7 F
siRNA用量 . 54
- B3 b* h; Y; ~+ [3 D: u7 D& }5 J转染试剂的体积 54
% D" w$ r# s% W- D$ T0 k细胞密度 54% a6 h6 n8 K; o' O$ O
暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
0 c3 ]/ H$ ?+ s7 ^2 a) r转染过程中存在血清 . 55$ Q+ N% m' O% A# d$ i; u
siRNA实验成功的技巧 553 b- }3 X+ ?0 S) e
siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 56- ?& m: b' [9 [
影响siRNA效率的因素 561 o; @5 D2 J7 E% L/ R
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
$ f' b9 E' Y# k3 C转染产品列表 . . 57
+ D) S3 B0 I* Y( ?转染试剂 57' n6 w( e8 L2 D9 [
Neon®转染系统 . 58
! r0 Y }. h) @; t6 \9 sRNA干扰 581 J; T+ F, v& h4 A$ S
参考文献 . . . 59
, S* y: c$ n) b- `& C" }" R3 c |
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发表于 2015-7-9 09:28
