脐带间充质干细胞难以消化

chrindy

       之前自己取脐带提了脐带来源的MSC，在培养皿内当一个克隆密度达80左右就开始消化，因为以前消化MSC用的都是0.05%的胰酶（含EDTA），这次也是，但是发现MSC很难消化下来，最后能消化下来种到培养瓶内的细胞数目比较少，不过细胞状态比较好，也能长起来，后来就改用0.125%的胰酶（含EDTA）进行消化传代，发现还是需要比较长的时间，是因为我的细胞状态不好吗，还是说脐带提的MSC本来就比较难消化？

ywx6302706008

间充质很好消化的呀，室温就可以轻而易举消化下来，是不是你在消化前没有用pbs洗两遍呢，去除玩培养基后最好pbs洗两遍

ych123

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7 E3 a) O, |# I谢谢你的意见

wuhuaguo88l

首先用PBS将细胞洗2-3次，目的是去除血清，避免中和胰酶的消化能力；其次，胰酶最好37度孵育几分钟，因为胰酶最大的酶活温度是37度；最后，要根据不同细胞使用相应浓度的胰酶，比较难消化的，可提高到0.25。

ych123

回复 chrindy 的帖子: [2 Z. \- w, w4 T* N
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哦，我养的原代的感觉很难消化下来，T25的用的0.25%的胰酶1ml，消化了2分钟的样子，不知道会不会过，而且每次第二代感觉状态不咋好

chrindy

回复 ych123 的帖子' p+ O3 W" k" Z  j9 j  w0 x
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状态好的MSC很容易消化，用0.25%胰酶的话动作要快，不然很容易消化过头影响细胞活性，我看一般大家消化MSC都用0.05%或者0.125%的胰酶，我用0.05%胰酶消化个30秒左右也就差不多了

ych123

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4 X# K% X' O; ?5 c是的，我是自己提的，都没啥进展啊，，想问一下买回来得0.25%的胰酶必须得稀释吗，我没稀释，昨天传了一下，感觉贴壁的细胞好少啊

chrindy

回复 nkcell 的帖子) S$ L' [8 V# K4 s3 U3 b! z
4 u, A5 W3 M) x; ~1 }
我是自己提的脐带MSC，可能不是很纯，想问一下大家都怎么避免内皮细胞混杂进去啊，我觉得刮也刮不太干净

chrindy

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0 U3 Z8 o; h6 O$ @1 b8 j
4 q1 v8 H/ c8 u一般我都是用0.05%胰酶消化也挺容易的，这批不好消化的MSC后来长得很慢，开始变肥大，感觉可能是我有一次差不多长满才传代所以后面状态都不好了，真的不能抱有侥幸心理啊...

chrindy

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我最近养的细胞状态都不怎么好啊，你是自己提的MSC吗？？圆形细胞可能是杂细胞？？我同学之前试过同时养两种细胞，可能操作的时候没注意，感觉另一种细胞混进MSC里面了，养着养着MSC就被那种细胞淘汰了...