CIK细胞培养补液

gondobar

第0天T75培养瓶30ML培养基,细胞接种量是10的8次方，接种密度很高。$ e& c$ j+ S. q- b6 W
第三天全量换液不知为何，CIK一般不需要换液，直接补液即可。9 B: }3 ]: G, d, q. T( B- U
转入培养袋时间也过早。: G6 n- B1 {& F, ~
培养流程不科学。当然也许你方法独特，不做过多评价，加油！

gondobar

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  E& _/ Z) O& [7 g* y. Y9 d1.做流式一般回收时候做，不用培养液。PBS悬浮1*10·6。具体看流式细胞仪要求。3 r1 g( m0 u1 r( @) T
2.培养过程中补液一般控制在10·6次/ml,补液看细胞密度和培养基颜色。

gondobar

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流式细胞仪要求的检测范围大概就是1-5*10的6次方。1mL这个数值是无所谓的，进样量比这少，但是一般给个几毫升无所谓。

gondobar

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+ s& t% D7 r# W淋巴细胞亚群测定" d3 B& k  d9 v1 j0 R
原理：双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中， 与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数。淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD5+，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+；抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。 0 M8 }! m4 Y3 F  ?
要求1．样本量至少1ml。
) O  s( K" E. B$ K1 E0 Z6 y: T2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。4 S( U* U& _* a4 e5 Y
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。