脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子0 Y/ t! m, a6 ~3 q

. }" j* p0 n, U- ^. O* i我们培养的细胞第7天有很多细胞长出角，是别的细胞呢还是啥原因造成

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子* Q5 l- c& g0 I: M
8 ~( d, X4 J* k  @
好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？

鸵鸵

回复 张荣华 的帖子  n  y* c8 w! h, n; U& ~  `

: b6 f1 I: E$ z' S" c我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 hengton 的帖子8 B/ J5 {& h& @/ R

2 Q$ y6 c$ V$ D% ^+ k我用的是GT-551培养基  

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 % ~# O% H9 n) x* z5 h
回复 hengton 的帖子
4 Z1 `+ ?* R2 J$ a4 h1 p3 o  H( t) ^9 j- [/ Z
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

, I% Z+ e+ o& f0 ^
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
7 A( ]& R2 m7 B2 f; U0 S( F+ T0 ?! Z2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 cheeray 的帖子6 L( L' m; }, q  h
' E# B4 f3 s3 L, W
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

张荣华

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3 @1 X7 l! g  n
! B- J- z$ T" D& ~+ @请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

hengton

  s4 Z, I! I" F# e# f5 E! V9 T& Y; [+ v6 b' |6 T: M

. W: s) J: S# x7 C+ w1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；! N3 O+ B/ j( t2 l8 I  ?
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；1 \8 }+ P* p0 J( q) ]) U: w' d7 G
3. 重复离心洗涤共3遍；
6 D6 C+ i4 _% E, r& S# T9 J- L. y4 Z4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；& Z3 v! [' [* d; F, h( B
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
1 Z: B/ _. ~9 K8 Y6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
" Z2 z. H& G( V" B8 y# R0 P7 l, v  i$ ~7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。) C$ @6 j+ {8 ^