脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

  j% Q. K8 w% d6 F
3 o2 b' J' h0 F' R) U2 g6 @8 `( b  L/ R4 @: B% M# i
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；3 Y& d' H6 O* k, E0 m& R% N. A/ w
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
+ f! j/ j8 i+ j6 W3. 重复离心洗涤共3遍；
4 j6 x8 _  e, h5 p! h) u4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
8 n+ {7 [; y' O( Q4 I5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；$ K) h. R1 E/ q0 |* `
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
, h5 y' n, M* t6 n1 N1 a9 \7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。! v! C4 h1 _' X2 c+ s

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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& T3 f+ Q; L3 h. s3 `" u9 @6 U
$ C3 s: C8 ^$ v请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

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- b5 y6 a* d7 e% T4 }- ]1 A3 s5 v
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
- g' B. I- y6 U* D' o回复 hengton 的帖子4 Y5 [5 G& ~0 Y; C, V/ S
: z8 W1 q6 Z6 ~9 O/ Z9 Q. O  j
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

" l% I2 k8 w. X: _1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。! H+ V$ V& U6 D4 h
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

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6 m! n1 l* |& m/ V4 m+ `7 H3 U+ c2 y  N9 c0 Y, W
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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  }$ t: p0 o; z" J( X6 C: `; l7 F' \, U# K. g
我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子. |% J3 `3 \0 l) K
6 P# O2 r8 b( H
好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？