脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

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' C' Y9 C( e4 f4 o  z6 f, s& L
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；9 c* G* a1 e1 d5 I% p
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
; A; ], \7 M0 @& a3. 重复离心洗涤共3遍；
! o; ^  k& a. Q0 k+ V4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；7 f9 b! n: V$ L6 t2 a! @9 U
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；1 Y% E' ~$ ]- D: ?" ^
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
0 q, p) R+ x- C: m7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。# F# M" T- [8 b  t3 S

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

回复 hengton 的帖子3 S# g0 b* H# M, ^: m7 f4 o
6 R+ C1 R: B) r) x. _
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子: r: p0 Z; i. I6 V9 U
1 z, a* W' i8 F$ `& _$ H/ k+ e) b9 x
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 0 N! K& i4 ]' N: P: L
回复 hengton 的帖子3 |5 y1 I: _' C1 c3 T

, z* o5 f' l! {$ W- U请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

* H* z3 m. }2 e4 |: f
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。% a: T2 k0 x$ u+ S* }$ x
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子: p) M9 v- k& \- O# u  M+ E  q, g1 i
5 ^) Y! C: A9 n$ }& e! K1 O8 A. b
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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* ]( N' A% p" x& g$ t& [4 o
$ y$ U5 \/ p& u5 m4 z我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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; X8 \0 S3 W! @' ]0 n6 U好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？