脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

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& w, w  x/ `8 \7 l, E' z  y  ]4 m8 m6 v
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
& k* q3 F! s9 T, F" w2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；. o3 p' g% n  w4 u9 v" t
3. 重复离心洗涤共3遍；
9 h7 V: T! q! Z+ L! B. f- d4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
/ X6 z' R! B) k: z4 n9 h5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；# E9 H, k& a, Q- _
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；
" j6 E: |7 F3 E7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。5 x' Q/ l! Z; `1 V5 @. s. d

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

回复 hengton 的帖子
$ q; _# c! S2 q
( g% b3 n, D! s请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子$ H/ P' K9 ~5 `) u9 k( c
; g# w3 r* N: M# g/ j
不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
4 H. q+ a1 B' c  J, `1 O回复 hengton 的帖子
9 B5 S9 }% n& K! @9 g: ?. [- D  \5 T- P1 K
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

: `/ F3 L! e* E4 V
1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。8 v! {  E% o2 w5 R7 u% Y
2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子4 Z+ C1 I7 F0 F: u4 z8 L2 X

4 w$ X1 j0 }6 d+ K' r, h7 M我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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0 G- l, ~" |8 F  g2 B' y0 F3 i1 B/ M! P  D- K" k, w' c
我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子, t, O$ {6 G4 {! X4 f

9 F& H7 C" o- I7 l好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？