transwell 用THP-1做趋化实验 求助

cyperus

各位前辈
1 U# t4 L; v, g$ J1 _3 v8 K1 S最近在使用corning的5微米孔Transwell做趋化实验。使用的趋化对象是THP-1，测试肿瘤细胞对THP-1的召唤能力。# d3 J- b4 i! q+ g8 Z+ e% ?
我是收集培养过肿瘤细胞的培养基来做实验的，但是做了3次了还是没有细胞穿过...9 H, y& |8 {! \- n8 S# e
试过用Matrigel包被和不包被的Transwell，两次均没有细胞透膜。6 m: H: b1 A  E, p
如果您做过类似的实验，请求给予指点。将不胜感激..
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9 I* G) [; E, O2 ?  h9 ^4 U5 `5 c

shaozi402

细胞直径有多大？5um的孔，细胞能否穿过？

cyperus

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5 R; S- G; s. W) n0 m* Q
! J# l# A0 ~, D1 d5 N趋化实验时候，细胞会通过变形移动到趋化因子较高浓度的地方。正常的人体，细胞的趋化亦是如此。
( U" X, }; ^9 @; J  J6 _4 Y使用transwell时候，THP-1会变形穿过小孔移动。% o% |0 e& F/ U* Z7 J& \2 t* d
5um的孔径是适合THP-1穿孔的。详见conrning网页

tingting2113

实验过程应该没有问题，是不是细胞活力的问题呢？

cyperus

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$ Y/ q" \4 V: D2 ~tingting2113，您好
5 m3 j0 `( s; \您之前做过类似的试验么?2 a2 ?  ~, P; o3 {: S
细胞活性的话大约60%左右，但是在上室加细胞时候是按照活细胞数加样的。

tingting2113

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- P+ r! W* `( S7 u8 n' z/ t
* u. G; `# J8 T  F. I2 N4 `我用Transwell做过细胞的侵袭实验，和你这个过程差不多，之前没有做活力测定，只是选取对数生长期的细胞，没有用Matrigel包被，结果是有细胞穿过的。

cyperus

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! r$ E  a! j0 |& p6 E7 z) F) g9 X. J4 q& J- w
你用的什么细胞做侵袭？也是THP_1么4 i. N% Q( `/ N" w1 u
没用Matrigel包被的话，就跟趋化实验类似了。穿过的细胞多么

tingting2113

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+ _5 c3 b3 w) o( R2 U- p  O5 D: \& D7 G* i) j2 h
我们用内皮细胞做侵袭实验，目的是为了验证条件培养基的抑制侵袭作用，DMEM作为对照。效果还挺明显的。

cyperus

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& w" E% o7 N& T# ^" O+ o: K2 k" e好的，谢谢您的帮助。明天我再试试如何。( p. `/ J5 O0 L$ i) G
你放多少细胞在transwell里面，然后培养多长时间呢。这个时间也是关键
8 e) W8 `1 X: s" d9 t如果方便，可不可以告知呢' d& w9 B+ G- K4 [9 V0 k  c" B
谢谢咯

tingting2113

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) d: O. p( a4 j" N* @' m& P/ k2 B8 a) L+ V
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