复苏后的细胞没有长起来？？

顾哲

我冻存的feeder复苏以后就没有长起来，请问有哪些原因容易导致这种情况的发生？

gxbzjznn

冻了多长时间？还有你这个冻存液配方是什么？

nichifanlema2

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/ c3 k# m% A/ _; S; F
2 @5 {7 z0 T/ T0 n3 n" X2 ~3 hfeeder是很好培养的. p  w8 M( X2 `0 p4 x
1. 有可能你辐照或者MMC处理过度了；+ E+ F7 O$ K( q& J! z
2. 要37度快速复苏，然后去掉冻存液；
7 |. M1 M- f& N; U" a( F3. 如果是一开始能长，过几天不长了，有可能是培养基的问题，培养基中需要加L-Glu和NEAA。; L. Q1 ?7 @4 p" I; H; U% w
4.如果细胞是飘起来的，有呈簇的，培养基浑浊偏黄，有可能是污染引起的

huqiao1649

1.冻存前后操作是否合理，操作可能对细胞造成很大的损伤，冻存后细胞活性降低。
- t# ~/ E3 \8 W# |6 F1 C2、冻存液、培养基是否合适。

yeshch

第一，冻的时候就没冻好。比如冻存液不好，冻存盒降温不好。也有可能冻存太久细胞状态就是不好了。  A5 ~( M, J0 t& ^' N/ z! L( K( I
第二，复苏不好。复苏时间太久，或者吹打力度过大，还有可能是培养基的问题。
$ R, _3 @6 @8 c' W$ q/ x/ K第三，可能性较小，就是选用的培养皿就是悬浮培养的（不会贴壁(⊙o⊙)哦）

顾哲

回复 gxbzjznn 的帖子
7 m0 X0 E8 x# r' T/ v# T5 N' a, g0 o2 z1 ~% i
在-80摄氏度冻存一天后，放到液氮里保存起来了。然后从液氮里取出来复苏的

顾哲

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4 |' A' R; C) C# w& |, N5 x( ^" _! A
恩恩，很有用，谢谢您

顾哲

回复 huqiao1649 的帖子, V+ {" {5 d1 ~  y* r' c4 o; l  Z

5 Z/ Y% ?  Y+ U' J+ d恩恩，第一次做feeder，操作很匆忙，因该再细心点。谢谢您

顾哲

回复 yeshch 的帖子
3 c, `+ M: [) b5 l1 D& [  [( N' ~+ \- L+ ~
冻存液的配方一开始弄错了，最近刚把冻存液配方弄对。谢谢您

baby00000003

先从融化后的活率做起吧，2 Y5 F% X( h0 J6 a0 ^0 M: {& H
粗略一点可以做苔盼蓝，细致的可以用CCK－8，或者PI／annexin跑流式