复苏后的细胞没有长起来？？

顾哲

我冻存的feeder复苏以后就没有长起来，请问有哪些原因容易导致这种情况的发生？

gxbzjznn

冻了多长时间？还有你这个冻存液配方是什么？

nichifanlema2

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! ?" D: g4 ~* s' T* S" e. C9 V7 T8 C# x; n$ d, @& Q4 [1 [: R
feeder是很好培养的
+ R6 D  N: s0 \! u1. 有可能你辐照或者MMC处理过度了；8 v9 M( x: ]3 H4 O: |+ g' f
2. 要37度快速复苏，然后去掉冻存液；% R) T5 \' Q$ U% e* E1 n; R) ?
3. 如果是一开始能长，过几天不长了，有可能是培养基的问题，培养基中需要加L-Glu和NEAA。- n5 C. O: ]6 m8 X6 x8 {, {
4.如果细胞是飘起来的，有呈簇的，培养基浑浊偏黄，有可能是污染引起的

huqiao1649

1.冻存前后操作是否合理，操作可能对细胞造成很大的损伤，冻存后细胞活性降低。
! f5 A5 a* @- J3 T+ y! k. H2、冻存液、培养基是否合适。

yeshch

第一，冻的时候就没冻好。比如冻存液不好，冻存盒降温不好。也有可能冻存太久细胞状态就是不好了。
- H0 ]$ u( r* x5 f! p& a2 A9 ]第二，复苏不好。复苏时间太久，或者吹打力度过大，还有可能是培养基的问题。( P; P  ~. N/ L. K% M( \
第三，可能性较小，就是选用的培养皿就是悬浮培养的（不会贴壁(⊙o⊙)哦）

顾哲

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# M0 Z) E9 y5 B& J% r
" x! m- c) I( X' c在-80摄氏度冻存一天后，放到液氮里保存起来了。然后从液氮里取出来复苏的

顾哲

回复 nichifanlema2 的帖子$ C7 R# X& y+ Z1 @, m9 u
4 \$ b3 }$ k- z" b4 _# o
恩恩，很有用，谢谢您

顾哲

回复 huqiao1649 的帖子( U! i! ^8 x+ |
$ J) R1 q. ~) _# Z; H
恩恩，第一次做feeder，操作很匆忙，因该再细心点。谢谢您

顾哲

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) B# p/ j: X  b
4 C3 @  \0 ^0 a' q. Y6 m, E( y冻存液的配方一开始弄错了，最近刚把冻存液配方弄对。谢谢您

baby00000003

先从融化后的活率做起吧，7 Q; L) `2 _. \  m) P
粗略一点可以做苔盼蓝，细致的可以用CCK－8，或者PI／annexin跑流式