复苏后的细胞没有长起来？？

顾哲

我冻存的feeder复苏以后就没有长起来，请问有哪些原因容易导致这种情况的发生？

gxbzjznn

冻了多长时间？还有你这个冻存液配方是什么？

nichifanlema2

回复 顾哲 的帖子) O  b- X$ p: E" R5 L8 Q

0 G" C6 Z7 k" ^4 a. ffeeder是很好培养的
/ f* S% I7 H7 s9 N1 I1 a1. 有可能你辐照或者MMC处理过度了；$ u) L/ ^/ R! y2 S# `/ E
2. 要37度快速复苏，然后去掉冻存液；
/ |, q: E& Q' @) t0 Q3. 如果是一开始能长，过几天不长了，有可能是培养基的问题，培养基中需要加L-Glu和NEAA。
& ~7 `# d. v, Y# ^' c, B4.如果细胞是飘起来的，有呈簇的，培养基浑浊偏黄，有可能是污染引起的

huqiao1649

1.冻存前后操作是否合理，操作可能对细胞造成很大的损伤，冻存后细胞活性降低。
; b' R4 y6 [0 M3 r9 w9 d2、冻存液、培养基是否合适。

yeshch

第一，冻的时候就没冻好。比如冻存液不好，冻存盒降温不好。也有可能冻存太久细胞状态就是不好了。6 G' C3 R" ]) W  {2 K
第二，复苏不好。复苏时间太久，或者吹打力度过大，还有可能是培养基的问题。  x4 q3 O  w6 m, x; X9 ?& s% u; T
第三，可能性较小，就是选用的培养皿就是悬浮培养的（不会贴壁(⊙o⊙)哦）

顾哲

回复 gxbzjznn 的帖子4 p. U# T8 t  @2 v$ o

6 `9 x' l' d$ \3 |; B: R在-80摄氏度冻存一天后，放到液氮里保存起来了。然后从液氮里取出来复苏的

顾哲

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% P+ U4 h$ z8 ?' u9 I+ k6 @& ?% G  K6 j, P0 [
恩恩，很有用，谢谢您

顾哲

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8 B3 w. p7 ^  C! S) t
% M) P. K* R. H' I恩恩，第一次做feeder，操作很匆忙，因该再细心点。谢谢您

顾哲

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% X' @  l* _: [# T* H, a1 k/ o
; R5 e4 Q/ S3 u, o! M8 E; w冻存液的配方一开始弄错了，最近刚把冻存液配方弄对。谢谢您

baby00000003

先从融化后的活率做起吧，
; `" l) A  S  H' J粗略一点可以做苔盼蓝，细致的可以用CCK－8，或者PI／annexin跑流式