为什么干细胞自己凋亡了？

121qwq

感觉养的其中一个间充质干细胞自己凋亡了，不像污染，因为没有浑浊，但是有部分细胞自己好像在慢慢卷缩死亡，有有经验的朋友知道吗？/ {7 p; W  X" t3 l* ~

, X+ A2 J7 }+ k' W9 J0 x4 f% }- Q9 |* g( ^0 H
5 f0 M! d$ A* Q: D
这个是另外一株养得挺好的' w, M) t& x% ~3 j

鸵鸵

细菌污染的话细胞培养液会比较浑浊，真菌污染反应出来的特征比较缓慢，建议你先排除下真菌污染，另外，也碰到消化过度出现这种情况

121qwq

回复 鸵鸵 的帖子& X" C0 t4 g# R, o4 e5 e9 M
! N0 U- ^- u. e2 k2 x
0.25的胰酶消化2min怎么样？ 一般都用什么浓度的胰酶消化多久

鸵鸵

回复 121qwq 的帖子7 O; V6 N- f/ `% W1 R9 i. O

0 T$ @3 N# R' ~我们用0.05的胰酶，放在培养箱中进行消化，但要注意观察，细胞生长状态良好时，消化的会非常快，之前用0.25的，但总是会消化过度，所以就稀释了，不知道你们消化前用PBS清洗几遍？

luoziwei

回复 121qwq 的帖子
! n! h% O1 g4 T6 d. |! n' A  j, ~4 w; l2 H$ Q( w3 G% |* c5 a
楼主，你这是刚接种的细胞密度太少了，等细胞长满自然就变成扁平状了，哪里还是MSC呀。一般一个T75瓶子长到90%的时候就要传代分为两个瓶子合适，MSC的生长密度也很重要

baby00000003

先把培养条件查一遍，比如血清批号、培养箱校准之类的
' |/ s4 m7 h2 Q& m9 k) U( V, F然后是细胞批次，比如冻存、解冻条件什么的
- O7 k% f" l( G如果没发现什么异常就换一批细胞重新试试看～

121qwq

回复 luoziwei 的帖子
( f- y* F6 Q0 N' O& I* ]0 u+ |2 _/ K# Y  D
没办法，本来分离的细胞就不多

121qwq

回复 鸵鸵 的帖子
1 ^3 z' L4 e6 Q' D" B$ @! s4 L, K
) E. Y. \$ M  l/ kPBS洗两遍，你们0.25胰酶稀释是怎么稀释，消化条件是怎样的？

chenguangyu

建议测量一下或重新对培养箱的二氧化碳浓度进去校准。可能是二氧化碳浓度偏低导致的。