最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

Tonypan

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3 T( c( Q/ r& u) G6 U* d: J' ]/ k
( G  N  ]- b# h" T# H& _/ }好专业

luyue6453

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/ y9 y: _6 i' h% N4 h2 W2 \) |$ E) c( y3 [! U" C3 j; b+ N
BD公司有一款检测间充质干细胞的试剂盒用起来很方便，我之前买的就是那么，一万多块钱，我现在还剩好多

ych123

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3 o; I0 ?* b- w/ M3 a" d
) M7 `. O3 r  v5 q0 C你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标
, {9 K, C3 q1 h2 ?$ }6 B$ K

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

ych123

回复 edwardellen 的帖子/ P: ]) Z4 ]1 {6 y% ^4 ]; i

# y7 d2 I# X1 ^5 z你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准9 F9 Q$ t( @" ^. r* H: F" S3 x
M Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317  I0 Q9 \+ V+ F" M$ x; w& F

9 ^% K, [* m& H
+ x3 A& V! F, U4 U* n* a间充质干细胞国际捡测标准) h# E, W& x4 M3 l# k1 t
1. 可在塑料培养器皿上贴壁,4 U! Y5 ?7 R3 c$ e# X
2. 细胞表型 + D8 Z  h7 @) H% y
正 (≥95%+) 负 (≤2%+)
5 A3 H- G# |- r4 l$ C! i) yCD105 CD45
  q  [, Q9 o' p+ D& j/ dCD73 CD34 1 }$ Q7 u5 q5 @6 I1 }
CD90 CD14 or CD11b # `5 D2 T( Z5 o# f3 [0 |
CD79a or CD19
: H8 c7 [: o4 h4 ?; v# {HLA-DR
( q1 J8 m6 U! S! B3 f3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。
( M! w  l" N* H& O6 `看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。
" E3 J0 R0 {; _9 T* k# O2 ^0 u先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。4 F  z; f4 A) r' w: o- z- L3 Q
这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。( ^: A" `& N8 Y, r' d4 r
染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。7 f# h+ X8 w, x% q
买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。
, R( h- l% Q6 q& S2 I9 B0 ?9 I' y# A做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ych123

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0 E9 u- j* C0 @- G- d* X7 M" c
* `' G5 m6 m2 |8 }+ m这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了