最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

swtarron

你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？

121qwq

骨髓间充质呢？同问

ych123

回复 swtarron 的帖子! _3 r" \7 I  T! X

  P8 D2 t" w, F: C/ z# V这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。
6 a3 @1 O+ s: D' b' a看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。9 P: f1 O8 q$ T( `
先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。
2 s- |: o3 W4 Z% F, t3 N: ~8 k这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。
0 c+ V5 }% ~1 i' ]染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。* N0 h, \) F2 K7 ^2 j; t& J
买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。
* [  G* b; U% `" M4 G! s做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准/ ?+ p( ^5 @1 m+ H
M Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317- X; D0 M' z. h/ z3 J

- V/ T, w- i& Y7 v3 ?( N2 t0 a' t1 X7 X  F! V" @3 x6 f3 N7 X
间充质干细胞国际捡测标准+ K( p7 L) E; K$ w9 m. g: P# n
1. 可在塑料培养器皿上贴壁,8 e6 k2 W* z% f& C
2. 细胞表型 ( Z/ u, [2 c( D7 ]* F+ P
正 (≥95%+) 负 (≤2%+) 0 F# @+ h/ D( [- T0 [
CD105 CD45 3 u4 v% z  U6 ^/ e) n5 q
CD73 CD34 : l/ D1 f, J, r0 C7 R& Q2 r
CD90 CD14 or CD11b $ Z  j/ w# [" X4 @: q- B7 l7 M( P; p
CD79a or CD19
( L, ~) k) E' K" zHLA-DR
1 i) n+ J! O, T: A8 T" f# }2 s$ ~3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

ych123

回复 edwardellen 的帖子# N& E+ u0 c8 l( l) L2 B/ k. _

  Y5 z) \) ]4 |3 k  T你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标7 W' T' }5 U' w8 t8 z0 H

ych123

回复 edwardellen 的帖子: G6 D9 V6 D& t, b. u

# z5 @/ F  ?: y% E你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢