最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

swtarron

你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？

121qwq

骨髓间充质呢？同问

ych123

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$ L5 x- p- F$ A9 J  O: w) m% ]6 [6 P1 ?0 L5 g* m9 c9 y- t" w# ^, {
这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。4 b6 M) s7 b- t" z, V  \
看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。; c$ F3 Q4 E. A; C
先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。
/ O" [! `! S) X$ m; d这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。1 F2 n3 B2 V/ A8 @8 z8 E; w0 M
染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。5 e  y* Q0 G$ E6 ^7 d) W
买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。
: D3 J6 l" r6 N. p做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准
- _+ N# R: K. a8 ~8 M* \M Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317, h9 _' N7 ]) M, g

% ^( I4 F3 P/ o! V9 x7 J5 H
- [, x% p6 p0 M/ ]4 @# O3 V间充质干细胞国际捡测标准/ U% p  f" K/ C) {6 j+ L' S
1. 可在塑料培养器皿上贴壁,  P8 }9 ]& n) F' |
2. 细胞表型 ; T8 [5 `7 ?4 T; T, K# d; M
正 (≥95%+) 负 (≤2%+)
  ^" t# N  X6 V  [3 [* yCD105 CD45 9 W- m' z3 C' j
CD73 CD34
& ]. d7 D+ @- w) Y, g3 ZCD90 CD14 or CD11b 7 q* a* P1 \- p4 f; r" h( k- h
CD79a or CD19
- d! X6 A: [/ f) W) c1 q$ S+ nHLA-DR - j) A; ~# h" l3 I- i- H
3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

ych123

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: d& L% `9 H3 N' q
6 k6 d0 l( V' E* _" ?( ^* M你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标" X3 A8 `: q' V  I

ych123

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1 w! i- y! {- `6 f( p
6 V/ ]- T# _7 [6 l你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢