最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

swtarron

你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？

121qwq

骨髓间充质呢？同问

ych123

回复 swtarron 的帖子9 d+ k9 A7 A" }
& K* W! L, `" [. m/ t
这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。' b4 X* ]& B$ P$ _9 j
看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。
* R( Q. c) B. R3 B: {$ n先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。
; E2 C* A6 ~7 N9 Q6 V这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。6 x* o- F7 {8 N8 a# U2 D# A
染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。
: q; w5 Q7 b4 P7 L4 w9 s买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。- {7 I2 z3 g, `" F, s3 R
做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准
  d% e& x$ C& X! D% q0 |7 Z1 FM Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-317
" S5 V; H# O( V5 N# p5 h! f+ _, t! X0 _8 A( {
0 E! F# _7 N) X! C* D" G
间充质干细胞国际捡测标准
2 G$ z. H, _) L& W# I+ R/ r) a* |3 }2 ^1. 可在塑料培养器皿上贴壁,
6 S0 P9 @! Q) T8 e" Y( h3 v  i2. 细胞表型 1 R) e( A' E. M( `4 G7 e. `
正 (≥95%+) 负 (≤2%+)
  X7 ]2 h, |( }CD105 CD45
, V  s5 v2 j6 R% n- hCD73 CD34
1 |  R: N  F$ u: bCD90 CD14 or CD11b
# f8 i: _+ Y5 t1 ?CD79a or CD19 / N7 A( ^* ~4 _4 }* `! L) _
HLA-DR & y. R) q  _, U4 `% e4 z
3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

ych123

回复 edwardellen 的帖子0 B+ i, P4 K3 O( t' c

0 P( w; q) j, {( l+ V你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标5 D5 `7 p! ]- _5 b( n

ych123

回复 edwardellen 的帖子: K0 c# w7 K/ s, T

  X: }2 W6 V- T* w, X& E5 I你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢