最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。

ych123

最近想做脐血间充质干细胞的流式细胞仪鉴定，谁有这方面资料啊，急急急。前期的样品制作步骤，要测CD105，44，34，45等，需要买什么抗体啊，，，

swtarron

你要做这些，就需要买这些抗体啊，要看你准备选择PE还是FITC。另外你好像少了一个比较重要的标志，CD73你不测吗？

121qwq

骨髓间充质呢？同问

ych123

回复 swtarron 的帖子( t8 v5 B2 L( ~* O$ Q. P' J
: \/ {1 ?% q' z
这个抗体是怎么选择的啊，好像有的是PE有的是FITC 具体选择原则是什么啊，还有我们这边的机器可以同时做4个指标，我们是需要同时做吗，还是一次做两个标记就可以了

edwardellen

想测什么标志，就买相对应的荧光抗体，一定要注明是做流式的专用抗体，BD的效果很好，操作简便。# \" w9 B/ F) L$ g2 Y+ [
看你是要做什么用，如果是才开始做，没什么经验，又想快出结果，可以买小包装的FITC或者PE抗体试试，一两种荧光就可以了。" p. A! L4 b1 G# c* d' |% N! \0 M
先从单染开始做吧，同一个批次的细胞，分成多个管，空白，对照，以及分别标记的单标抗体。3 i- d  ~# \2 E  c0 ^& e
这样的话，互相之间没有干扰，结果也很清楚，做好了在做复染也来得及，我们这是分开单染的。
  Q; C. D% p# r6 S7 @# A$ l染色方法，在网上搜一搜就很多，如果使用BD的抗体，只要消化细胞，制成单细胞悬液，加PBS洗涤离心，之后加抗体标记，室温30分钟左右，PBS再洗一次，重悬细胞后，就可以上流式检测了，跟做别的流式检测差不多。细胞数量要10的6次方以上，因为要洗很多次，会丢细胞。BD抗体标记的反应体积是100微升。
/ M7 @: \5 B% W3 a9 S4 Y  Y买抗体的时候，记得要买相应的非特异抗体，流式检测的时候一定要加这一组作为对照。
+ O1 R9 ]( z( n7 M# b, ?做就是检测，细胞收集以后要抓紧做，因为细胞不用固定，耽搁的时间越久，越容易对结果产生影响。

ywx6302706008

内容国际细胞治疗学会2006年制订 干细胞国际标准! r& E8 x4 D7 i5 `
M Dominici et al., Cytotherapy 2006, 8(4):315-3171 {7 Z/ N# g. _# Y7 @* c

, I* M9 W$ `: r4 e( }* S$ Q2 d: A4 H
间充质干细胞国际捡测标准& n4 y! m, l  S- B7 T# o" z
1. 可在塑料培养器皿上贴壁,9 g/ P" r" }# {+ V
2. 细胞表型
; t( H) H* ~' `; j: K, Y正 (≥95%+) 负 (≤2%+)
$ D7 A# O& |4 M) uCD105 CD45
' j5 u7 h% a( X; Z% @6 uCD73 CD34 . [! x" ]4 u$ U1 a: @% N  {
CD90 CD14 or CD11b
+ C) \" Z0 Z( m8 h  K7 P, l- Q; tCD79a or CD19 , e0 T! E: H+ ]# W
HLA-DR % p8 D8 j7 L2 v5 W
3. 体外培养条件下可用标准分化液引导向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化

ych123

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( w7 l! a5 Y" I5 ]/ U# Q- S2 @: t4 U2 v$ R% _" x! B
你好，谢谢你的宝贵意见，我就是做鉴定脐带间充质干细胞，还要买相应的非特异性抗体啊，比如我做的cd73-APC的BD的抗体，阴性对照买什么抗体啊

ywx6302706008

买ebioscience的流式抗体呀，颜色的话一般你不用太在意，毕竟都只是做单染

小云龙

准备选择PE还是FITC，一般实验室用CD73  CD 105   CD90三个标准就行了，如果要求高就要参照间充质的国标: Y  `% o; Z4 [6 U! m; I" A

ych123

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8 m- r9 v5 H) U6 C5 y/ C) N3 N! U% K; C% s/ E
你好，有具体的上机前的流式细胞术方案吗，我看有的说要在4度孵育的，还有就是我在BD的官网怎么找不到PROTOCOL啊，非常感谢