如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？

地球外世界

如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？可能是离心机的使用，转速调制3200r,单核细胞层仍有部分红细胞或其他细胞，分离出的细胞层不明显。

momoenn

1.离心时要慢升慢降；离心机要稳，你可以在离心的时候把离心机装满，不要只单独离心两个管。
& u3 |0 ]* b0 N2 F8 @) |2.离心转速和血量也有很重要的关系，如果50ml以上血液，可以采用600g转速，离心25min试试。' U9 c0 D" Q" \# Y, X0 H* \
3.离心效果和血液来源关系也不小，一样的过程，一样的条件，用外周血的话，白膜层回比较干净一些；但是如果是脐血，或多或少都会有红细胞。个人觉得ficoll分离用的是密度梯度离心，脐血各种细胞的密度和成人外周血相比可能还是有一定程度的差别。
; T% \/ t; E) d+ [4.温度，一定要控制在20度左右，还是因为是密度梯度离心，各种试剂的密度都是在20度条件下测得。

fangtaoye

要慢慢的把样品加到淋巴分离液，沿着管壁慢慢加入即可，我们的比例是分离液比样品1：2的比例，然样品浮在分离液上面，拿的时候千万小心，尽量不要晃动，另外，楼主的转速太快了，我们是600G，还有就是降速的时候尽量慢。

myylovewp

2000-2500转/分，一定把降速设置一下（慢降），温度也会有影响，要20度左右吧。

edwardellen

我们操作的经验是400g比较好，转数要根据你们的离心机自己调，离心20分钟，要用低温离心机，用透明度好的离心管。
/ P) D2 l. ~! M2 I7 o9 b血可以用生理盐水1:1稀释混匀之后再加到分层液上。- y1 R2 i, s% D% u: `9 T9 G
所有的操作，动作不要剧烈，心平气和，手要稳。
$ V0 h, T3 d5 p, m) `加血的时候，动作轻缓，将血滴到管壁上，让血滴慢慢滑落到分层液上。
# ^' x. N+ S2 @  o标记什么的提前做好，不要把东西都加完了，才想着标记什么的，晃动带样本的管子。
7 H9 {% H! E. n- g0 f* I离心结束后，尽快吸白膜层，尽量不要吸到分层液。
3 X+ f. S; T& T. i. o如果你都做到了，还是分层不好，那有可能是血的问题，毕竟每个人的健康状况都不一样，不是每个人都跟教科书一样健康，个体差异都是难免的。

121qwq

主要是下降时加速度调到最慢，离心管在整个操作过程轻拿轻放。你能做到这个，基本上没问题了。

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" Z& b, S" F0 K) r: e
6 y/ l4 J9 {- @, U嗯嗯，谢谢指点

地球外世界

回复 jinhaifeng 的帖子! t4 f$ i3 i2 j! {7 [* f
  g8 Y1 _8 E& h1 c4 }
那么意思主要还是要看离心力的

月_幻影

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! K# V2 v$ F1 c+ {( }' j! w( D% j/ U% l; `6 j, Y; F
嗯、多练习几次熟练了就好了，祝成功~

地球外世界

回复 月_幻影 的帖子6 d8 I4 H+ l4 f' \  ~2 m* D

2 d9 H4 K5 S6 ?, K  A/ Q非常感谢，说明的很详细，我能想象着做到，平衡问题，得多练习几次，估计会好些