如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？

地球外世界

如何使淋巴细胞分离液密度梯度离心后分离的细胞层明显清晰？可能是离心机的使用，转速调制3200r,单核细胞层仍有部分红细胞或其他细胞，分离出的细胞层不明显。

momoenn

1.离心时要慢升慢降；离心机要稳，你可以在离心的时候把离心机装满，不要只单独离心两个管。- i  K! u: |/ l4 H
2.离心转速和血量也有很重要的关系，如果50ml以上血液，可以采用600g转速，离心25min试试。, Y4 o# Y5 b' R$ |8 d
3.离心效果和血液来源关系也不小，一样的过程，一样的条件，用外周血的话，白膜层回比较干净一些；但是如果是脐血，或多或少都会有红细胞。个人觉得ficoll分离用的是密度梯度离心，脐血各种细胞的密度和成人外周血相比可能还是有一定程度的差别。( ~8 h$ E* d. m1 [+ `9 M
4.温度，一定要控制在20度左右，还是因为是密度梯度离心，各种试剂的密度都是在20度条件下测得。

fangtaoye

要慢慢的把样品加到淋巴分离液，沿着管壁慢慢加入即可，我们的比例是分离液比样品1：2的比例，然样品浮在分离液上面，拿的时候千万小心，尽量不要晃动，另外，楼主的转速太快了，我们是600G，还有就是降速的时候尽量慢。

myylovewp

2000-2500转/分，一定把降速设置一下（慢降），温度也会有影响，要20度左右吧。

edwardellen

我们操作的经验是400g比较好，转数要根据你们的离心机自己调，离心20分钟，要用低温离心机，用透明度好的离心管。
: g- w; M+ f8 u/ X( p: M血可以用生理盐水1:1稀释混匀之后再加到分层液上。
1 |/ E7 B* x! {+ ~. i; @所有的操作，动作不要剧烈，心平气和，手要稳。
7 f, E$ B7 `% z加血的时候，动作轻缓，将血滴到管壁上，让血滴慢慢滑落到分层液上。
5 [7 H; K0 ]- d, Q3 c标记什么的提前做好，不要把东西都加完了，才想着标记什么的，晃动带样本的管子。0 F. R) p, r2 S, q" z! ~0 J
离心结束后，尽快吸白膜层，尽量不要吸到分层液。4 d9 t+ c% L  e& G9 ]5 x8 _
如果你都做到了，还是分层不好，那有可能是血的问题，毕竟每个人的健康状况都不一样，不是每个人都跟教科书一样健康，个体差异都是难免的。

121qwq

主要是下降时加速度调到最慢，离心管在整个操作过程轻拿轻放。你能做到这个，基本上没问题了。

地球外世界

回复 月_幻影 的帖子  `9 A$ S# y1 j  o* [; r" Q, M
2 r: z6 f5 L' P1 ~% _7 o) B) }; j
嗯嗯，谢谢指点

地球外世界

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+ s& V  q3 M6 h* W' x5 M/ e4 p
0 `4 ]# B# ^+ o0 \+ r; ~! C- m那么意思主要还是要看离心力的

月_幻影

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5 x+ v5 L% C; d2 }/ ?/ C0 g8 |1 F嗯、多练习几次熟练了就好了，祝成功~

地球外世界

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. a( k. o: Y* ?( H& X" {) \+ l/ ~5 m+ g! c& x$ r7 ^
非常感谢，说明的很详细，我能想象着做到，平衡问题，得多练习几次，估计会好些