自体血清的获取

醉心科研

请教有经验的研友：
5 O& j: N0 c* O- j# j免疫细胞培养中有时候会添加自体血清，都怎么得到的呢？
& ^- Z6 {, s9 q: x9 N0 H; \1 单独用无抗凝剂的管取一管6 J, C8 G! P: R
2 抗凝管取血离心后取上清
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' a7 \" b0 C7 u" C# O用1比较奢侈，我用2，但灭活发现变浑浊，高速离心也无法澄清。
& I: V/ p& ~4 l4 b7 y4 }! O# l  c% m( h有没有更好的处理方法？还是我的方法有不对的地方？

wuhuaguo88l

抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后续细胞培养。

醉心科研

wuhuaguo88l 发表于 2015-10-13 16:08 / W: I) H3 `; r3 d3 N# H# A
抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后 ...

7 _: W7 _5 q; w+ I/ c1 x很详细，多谢。
7 e6 p! V+ x) W& f) R& D7 z9 r  N跟我的差不多，但是我转速没你高。
; f# H5 ~. i0 R( O( `& y灭活后我也离心去沉淀了，但是结果没有灭活前澄清了，你觉得可能是哪里的问题？

ganggangtry100

离心去除血细胞，取上清，灭活，可以很好的培养细胞，但该物质准确点说应该是血浆，不算是血清。' e0 Z0 n& |4 q; m) ~; ?
因为血浆在灭活的过程中，很多蛋白会热变性析出，即便是高速离心，有些蛋白也是很难沉淀下来，你可以使用0.22um针头滤器过滤一下，立马和之前一样澄清了。

roosevelt9999

将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层的血清，密封好后，置于恒温（56度）的水温锅内30分钟，等时间到后，取出放于室内，等到室温后，再放于4度冰箱10分钟左右，取出以3000转，8分钟，升降都为9离心，即可得到比较清的血清。以后用之前，再离心一次，看看是否还有沉淀。一般这样操作之后，血清无沉淀。

醉心科研

回复 ganggangtry100 的帖子6 ]# L! {; Z9 ~, e* e' d  A, }* d
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嗯，血浆。过滤是个办法，但恐怕滤器滤不了几毫升就堵了。

醉心科研

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roosevelt9999 发表于 2015-10-14 11:07
4 e" a. {9 J" F- j- P" @* `; q将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层 ...

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+ a& C' ^+ C+ A非常详细，谢谢！我得好好试试。

3254938

你要是觉得混。。可以考虑直接用盐水稀释全血，分PBMCs后取上清作为血浆用，常规灭活。。一般问题不大。。: d8 S' q, d) u
全血如果直接离心取得上清，没有灭活好，容易导致细胞前期出现一层的絮状物。。。损失大量细胞。。

醉心科研

回复 3254938 的帖子+ [2 H; ?8 _' x2 v# _) s6 r6 W3 l

$ m- O0 f3 l: W8 A# G+ S临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不

御剑红尘

对于血清灭活的问题，首先要搞清灭活的目的，选择56℃灭活不外乎是灭活可能存在的病毒或灭活补体物质。灭活过程中可每隔几分钟微微晃动利于充分灭活。然后是离心速度和时间的，曾经试过高速（约1000G）还是有悬浊物，这时可暂时不吸出上清，4℃冰箱过夜，悬浊物沉淀下去，小心吸到另外一个无菌容器即可。