自体血清的获取

醉心科研

请教有经验的研友：
, a6 g4 x0 @' {2 s5 s: S" f2 Z. r免疫细胞培养中有时候会添加自体血清，都怎么得到的呢？3 i, g! Q# n+ H, s1 h! i+ B6 g7 s
1 单独用无抗凝剂的管取一管9 r" g; i- N7 |+ r8 R# B8 f
2 抗凝管取血离心后取上清
3 m% B) i+ d! g: D4 `  p0 C. Y2 ~- b) `
用1比较奢侈，我用2，但灭活发现变浑浊，高速离心也无法澄清。- Q  z7 x/ c' T( k% i0 l. y# t
有没有更好的处理方法？还是我的方法有不对的地方？

wuhuaguo88l

抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后续细胞培养。

醉心科研

wuhuaguo88l 发表于 2015-10-13 16:08
' \7 [! X9 l0 M抗凝血离心2000rpm，10min,注意将离心机降速减小些，吸取上清，56度灭活，再次离心，去掉沉淀，就可以用于后 ...

# ]. a, h3 m/ x, X5 z1 t很详细，多谢。
3 o: s+ \  W$ H* x  @: n跟我的差不多，但是我转速没你高。4 r4 e  y& N0 L9 B0 m) `" ^1 {
灭活后我也离心去沉淀了，但是结果没有灭活前澄清了，你觉得可能是哪里的问题？

ganggangtry100

离心去除血细胞，取上清，灭活，可以很好的培养细胞，但该物质准确点说应该是血浆，不算是血清。) f: p4 r8 s1 Q6 j9 [& Y2 C% M
因为血浆在灭活的过程中，很多蛋白会热变性析出，即便是高速离心，有些蛋白也是很难沉淀下来，你可以使用0.22um针头滤器过滤一下，立马和之前一样澄清了。

roosevelt9999

将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层的血清，密封好后，置于恒温（56度）的水温锅内30分钟，等时间到后，取出放于室内，等到室温后，再放于4度冰箱10分钟左右，取出以3000转，8分钟，升降都为9离心，即可得到比较清的血清。以后用之前，再离心一次，看看是否还有沉淀。一般这样操作之后，血清无沉淀。

醉心科研

回复 ganggangtry100 的帖子% G) J% }; ]# P! B  H% U
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嗯，血浆。过滤是个办法，但恐怕滤器滤不了几毫升就堵了。

醉心科研

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roosevelt9999 发表于 2015-10-14 11:07
7 f5 O5 v& B" f将采的外周血均匀的分到离管内，以3000转，8分钟，升速为9，降速为6，放于离心机内离心；离心完后，吸取上层 ...

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( ]0 ]' o: o7 m2 |非常详细，谢谢！我得好好试试。

3254938

你要是觉得混。。可以考虑直接用盐水稀释全血，分PBMCs后取上清作为血浆用，常规灭活。。一般问题不大。。
  l3 D: c! ]9 p8 |$ H5 }& c1 U, N全血如果直接离心取得上清，没有灭活好，容易导致细胞前期出现一层的絮状物。。。损失大量细胞。。

醉心科研

回复 3254938 的帖子, T, V1 v+ y8 V) J& |" X) h$ j% y
) H- _9 O1 |7 V7 Q4 L/ W/ `
临床上是这样做的吗？分PBMC后的血浆能用于患者细胞培养不

御剑红尘

对于血清灭活的问题，首先要搞清灭活的目的，选择56℃灭活不外乎是灭活可能存在的病毒或灭活补体物质。灭活过程中可每隔几分钟微微晃动利于充分灭活。然后是离心速度和时间的，曾经试过高速（约1000G）还是有悬浊物，这时可暂时不吸出上清，4℃冰箱过夜，悬浊物沉淀下去，小心吸到另外一个无菌容器即可。